[H2О2CA + РGЕS]-фенотип: естественный отбор in vivo
В табл. 2 и рис. 4 суммированы результаты испытания родительских линий клеток, включая v-src-трансформанты и клетки штамма ХЭТР . Все исходно не экспрессировавшие [H2О2CA + РGЕS]-фенотип родительские линии клеток трансформантов и трансдуцентов были привиты подкожно нормальным животным с целью проведения их через ряд стандартных ( рис. 1 ) циклов естественного отбора in vivo.
После каждого цикла отбора (в течение 48-60 дней) полученные от индивидуальных животных вариантные линии опухолевых клеток (всего более 100 линий) были исследованы вновь на экспрессию [H2О2CA + РGЕS]-фенотипа , ТГА и СМА . Все вариантные линии клеток приобрели экспрессию [H2О2CA + РGЕS]- фенотипа и существенное (в 30-200 раз) усиление ТГА, иногда сопровождаемое СМА, между вторым и третьим циклами отбора in vivo (т.е. суммарно в течение примерно или чуть более 120 дней подкожного роста in vivo). Экспрессия СМА клетками ряда клонов, трансформированных LTSV40 и p53175 , была отмечена несколько раньше - уже после двух циклов отбора in vivo. В отличие от всех остальных линий клеток отбор in vivo клеток трансдуцента ХЭТР- bcl-2 был существенно задержан и экспрессия [H2О2CA + РGЕS]- фенотипа, как и существенное усиление ТГА (и СМА ), была выявлена лишь после 4-5 циклов отбора этих клеток in vivo (т.е. после 240-300 дней их подкожного роста).
Во время первого и частично второго циклов отбора in vivo вариантов ХЭТР-bcl-2 обращало на себя внимание то, что подкожные опухолевые узлы, формируемые этими вариантами, были почти свободны от видимого центрального некроза , очень характерного для опухолей, возникающих при прививке родительских клеток ХЭТР и всех остальных трансдуцентов этих клеток. Однако при последующих циклах отбора in vivo зоны некроза в опухолевых узлах ХЭТР-bcl-2 постепенно увеличивались и стали неотличимы от обширных зон некроза родительских клеток ХЭТР.
В целом после трансформации in vitro нормальных хомячковых эмбриональных клеток , возникшей спонтанно или индуцированной генами v-src , LTSV40 или Еlа ; Еlb , а также после трансдукции клеток ХЭТР генами Ha-ras , myc , p53175 и bcl-2 , все клеточные линии (кроме v-src-трансформантов ) не экспрессировали [H2О2CA + РGЕS]-фенотип и оставались низкотуморогенными.
