АПФ: активность химерных конструкций
Для понимания каталитических механизмов АПФ на молекулярном уровне большое значение имеет идентификация участков доменов, ответственных за их различие. На основании мутантных N- и С-доменов были получены две химеры [ Williams ea 1996 ]. Химера 1 представляла собой N-домен, в который вместо остатков 331-391 был встроен 60-членный пептид, соответствующий остаткам 929-989 из С-домена:
HASAWDFYNGKDFRIKQCTTVNLEDLVVAHHEMGHIQYFMQYKDLPVALREGANPGFHEAI.
Химера 2- это С-домен, содержащий вместо остатков 929-989 остатки 331-391:
HASAWDFYNRKDFRIKQCTRVTMDQLSTVHHEMGHIQYYLQY-KDLPVSLRRGANPGFHEAI из N- домена. Каждая из химерных молекул отличалась от соответствующего мутантного домена 13 а.о.(подчеркнуты). Поскольку антитела к N-домену связывались с химерой 1 очень слабо (3-4% по ставнению со связыванием с N-доменом) и не связывались вовсе с химерой 2 (как и с С-доменом), можно предполагать, что конформация химеры 1 отличается от конформации N- домена. Полученные химеры, однако, по соотношению Кcat гидтолиза субстратов Z-Phe-His-Leu (гидролизуется обоими доменами примерно с одинаковой скоростью) и Hip-His-Leu (гидролизуется преимущественно С- доменом) ( табл.3 ) не отличались от соответствующего домена. По-видимому, остатки аминокислот, отличающие химеру от соответствующего домена, не ответственны за различие в гидролизе исследованных субстратов доменами.
