CD-антигены: методы определения в клинике
Определение поверхностных антигенов лимфоцитов CD ( табл. 18.8 ) широко применяется при обследовании ВИЧ-инфицированных, в диагностике гемоблатозов, и других заболеваний, а также для контроля за приживлением трансплантата и эффективностью иммунотерапии. В настоящее время для определения поверхностных антигенов лимфоцитов применяются моноклональные антитела, меченные флюорохромом, и проточный цитофлюориметр.
Моноклональные антитела вырабатываются гибридомами, которые образуются при слиянии миеломных клеток с нормальными плазматическими клетками. Для фенотипирования лимфоцитов человека используют мышиные моноклональные антитела. Моноклональные антитела используют не только для выявления разных типов клеток, но и изучения процессов дифференцировки, созревания, межклеточного взаимодействия и активации лимфоцитов.
Флюорохромы - это вещества, которые поглощают падающий свет определенной длины волны и излучают поглощенную энергию в виде света большой длины волны. В большинстве случаев антитела метят флюоресцетна изотиоцианатом или фикоэритрином. Другие флюорохромы, например техасский красный, родамин, аллофикоцианин, применяются лишь с исследовательской целью.
Проточный цитофлюориметр - прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и оптическим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновременной оценки многих параметров клетки; размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Проточная цитофлюориметрия применяется также для анализа ДНК при исследовании клеточного цикла.
В большинстве клинических лабораторий для определения поверхностных антигенов лимфоцитов используют цельную кровь. Суть метода заключается в следующем:
- к небольшому объему цельной крови добавляют меченные флюорохромом моноклональные антитела;
- после инкубации, необходимой для связывания антител с антигенами клеточной поверхности, разрушают эритроциты;
- с помощью проточного цитофлюориметра анализируют клеточный состав пробы.
Результаты исследования выражают в виде абсолютного и относительного числа лимфоцитов разных популяций. Оценку результатов проводят с учетом нормальных показателей, которые зависят от возраста, пола и расы. Простой способ проверки надежности результатов заключается в том, что относительное содержание основных популяций лимфоцитов (Т-, В- и NK-лимфоцитов) в сумме должно составлять 100%.
В норме у взрослых около 70% лимфоцитов крови составляют Т-лимфоциты , при этом соотношение лимфоцитов CD4/CD8 превышает 1, как правило, оно составляет 1,5-2, остальные 30% приходятся на В-лимфоциты и NK-лимфоциты .
В клинических лабораториях проточная цитофлюориметрия широко применяется для определения содержания лимфоцитов CD4 при ВИЧ-инфекции.
Проточная цитофлюориметрия становится стандартным методом диагностики гемобластозов, поскольку позволяет определить тип и стадию дифференцировки трансформированных клеток. Этот метод применяется также для выявления других изменений клеточного состава крови и определения активированных лимфоцитов. Результаты проточной цитофлюориметрии, как правило, не позволяют поставить диагноз, но дают важную информацию для его уточнения.
