Инфекции вирусные: иммунодиагностика, общие принципы
В настоящее время широко применяются 4 способа диагностики вирусных инфекций:
- выделение вируса в культуре клеток (наиболее точный способ);
- выявление цитоплазматических, внутриядерных включений и гигантских многоядерных клеток в окрашенных мазках;
- выявление не менее чем четырехкратного возрастания титра антител к вирусу на разных стадиях заболевания;
- выявление вируса или его антигенов в тканях и биологических жидкостях с помощью экспресс-тестов.
Материалом для выделения вируса в культуре клеток могут служить мазки со слизистой глотки и носоглотки, мокрота, моча, кал, кровь, СМЖ, экссудат, биоптат. При взятии проб соблюдаются правила асептики, пробу помещают в стерильный контейнер и транспортируют в лабораторию. При подозрении на особо опасные инфекции соблюдают дополнительные меры предосторожности и используют специальное оборудование. Выделение возбудителя в этом случае проводят в специализированных лабораториях.
Соскоб со дна везикулы:
- Делают надрез скальпелем по периферии везикулы.
- Приподнимают отслоившийся эпидермис и удаляют жидкость с помощью тампона.
- Скальпелем делают соскоб со дна везикулы. При этом следует избегать кровотечения.
- Полученный материал переносят на 2 чистых предметных стекла и делают 2 мазка диаметром 5-10 мм.
- Мазки высушивают на воздухе и фиксируют спиртом. Фиксированные мазки окрашивают по Гимзе или обрабатывают антителами, меченными флюоресцентным красителем.
- Для получения надежных результатов соскоб производят трижды.
Продукцию антител к вирусным антигенам можно оценить с помощью реакции нейтрализации, реакции торможения геммаглютинации, реакции связывания комплемента и твердофазного иммуноферментного анализа. Пробы крови (2-10 мл) забирают на ранней стадии заболевания и спустя 2-3 недели. В стерильных условиях получают сыворотку, помещают ее в стерильную пробирку и до отправки в лабораторию хранят в холодильнике или замораживают (-20 градусов по С). Диагностически значимым считается четырехкратное повышение титра антител в ходе заболевания.
Реакция нейтрализации - высокоспецифический метод, основанный на связывании вируса антителами и его нейтрализации. Метод позволяет определить уровень противовирусных антител и способность исследуемой сыворотки нейтрализовать вирусы. Суть метода заключается в следующем:
- производят серийные разведения исследуемой сыворотки;
- разные разведения сыворотки смешивают с известным количеством вируса;
- сыворотку добавляют к культуре клеток, восприимчивой к данному вирусу;
- нейтрализирующую активность сыворотки оценивают по снижению способности вирусов инфицировать культуру клеток.
Реакция торможения геммагглютинации - высокоспецифичный и чувствительный метод, позволяющий определить даже незначительное количество противовирусных антител в биологических жидкостях. Этот метод основан на способности некоторых вирусов сорбироваться на эритроцитах, в частности на человеческих эритроцитах группы 0 и куриных эритроцитах, и вызывать гемагглютинацию. Если исследуемая биологическая жидкость содержит противовирусные антитела, при ее добавлении к вирусам будет наблюдаться торможение гемагглютинации. Чем выше содержание противовирусных антител висследуемой жидкости, тем сильнее подавляется гемагглютинация.
