Инфекции вирусные: иммунодиагностика, общие принципы

В настоящее время широко применяются 4 способа диагностики вирусных инфекций:

- выделение вируса в культуре клеток (наиболее точный способ);

- выявление цитоплазматических, внутриядерных включений и гигантских многоядерных клеток в окрашенных мазках;

- выявление не менее чем четырехкратного возрастания титра антител к вирусу на разных стадиях заболевания;

- выявление вируса или его антигенов в тканях и биологических жидкостях с помощью экспресс-тестов.

Материалом для выделения вируса в культуре клеток могут служить мазки со слизистой глотки и носоглотки, мокрота, моча, кал, кровь, СМЖ, экссудат, биоптат. При взятии проб соблюдаются правила асептики, пробу помещают в стерильный контейнер и транспортируют в лабораторию. При подозрении на особо опасные инфекции соблюдают дополнительные меры предосторожности и используют специальное оборудование. Выделение возбудителя в этом случае проводят в специализированных лабораториях.

Соскоб со дна везикулы:

- Делают надрез скальпелем по периферии везикулы.

- Приподнимают отслоившийся эпидермис и удаляют жидкость с помощью тампона.

- Скальпелем делают соскоб со дна везикулы. При этом следует избегать кровотечения.

- Полученный материал переносят на 2 чистых предметных стекла и делают 2 мазка диаметром 5-10 мм.

- Мазки высушивают на воздухе и фиксируют спиртом. Фиксированные мазки окрашивают по Гимзе или обрабатывают антителами, меченными флюоресцентным красителем.

- Для получения надежных результатов соскоб производят трижды.

Продукцию антител к вирусным антигенам можно оценить с помощью реакции нейтрализации, реакции торможения геммаглютинации, реакции связывания комплемента и твердофазного иммуноферментного анализа. Пробы крови (2-10 мл) забирают на ранней стадии заболевания и спустя 2-3 недели. В стерильных условиях получают сыворотку, помещают ее в стерильную пробирку и до отправки в лабораторию хранят в холодильнике или замораживают (-20 градусов по С). Диагностически значимым считается четырехкратное повышение титра антител в ходе заболевания.

Реакция нейтрализации - высокоспецифический метод, основанный на связывании вируса антителами и его нейтрализации. Метод позволяет определить уровень противовирусных антител и способность исследуемой сыворотки нейтрализовать вирусы. Суть метода заключается в следующем:

- производят серийные разведения исследуемой сыворотки;

- разные разведения сыворотки смешивают с известным количеством вируса;

- сыворотку добавляют к культуре клеток, восприимчивой к данному вирусу;

- нейтрализирующую активность сыворотки оценивают по снижению способности вирусов инфицировать культуру клеток.

Реакция торможения геммагглютинации - высокоспецифичный и чувствительный метод, позволяющий определить даже незначительное количество противовирусных антител в биологических жидкостях. Этот метод основан на способности некоторых вирусов сорбироваться на эритроцитах, в частности на человеческих эритроцитах группы 0 и куриных эритроцитах, и вызывать гемагглютинацию. Если исследуемая биологическая жидкость содержит противовирусные антитела, при ее добавлении к вирусам будет наблюдаться торможение гемагглютинации. Чем выше содержание противовирусных антител висследуемой жидкости, тем сильнее подавляется гемагглютинация.

Ссылки: