Ассоциация strA-strB генов с плазмидами
При исследовании механизмов распространения детерминант устойчивости в популяциях древних бактерий и изучения ассоциации генов устойчивости штаммов древних бактерий с плазмидами и транспозонами в качестве модели были выбраны гены устойчивости к стрептомицину strA-strB, механизмы горизонтального переноса которых подробно изучены. Показано, в частности, что гены strA-strB распространяются с помощью плазмиды широкого круга хозяев RSF1010 и родственных плазмид [ Rawlings, 2001 ], а также входят в состав стрептомицинового транспозона Tn5393 и его производных [ Chiou, 1993 , Sundin, 1995 , L'Abee-Lund, 2000 ].
Для исследований были взяты штаммы древних бактерий различного генезиса и возраста, относящиеся к различным систематическим группам ( табл. 1 ). Параллельно были исследованы несколько устойчивых к стрептомицину штаммов современных бактерий, выделенных из различных образцов почвы и воды и также несущих гены strA-strB ( табл. 1 ). При идентификации штаммов бактерий были определены последовательности генов 16S РНК с помощью специфических праймеров [ Lane, 1991 ].
Для выявления плазмид, несущих гены strA-strB использовались классические методы их обнаружения: конъюгационный перенос, опыты по трансформации, а также электрофоретический анализ плазмидной ДНК. В качестве реципиентов в опытах по конъюгации и трансформации использовались штаммы Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida и Acinetobacter calcoacetricus [ Холодий, 2000 , Mindlin, 2001 ]. Результаты этих опытов представлены в табл. 2 . Все плазмиды с устойчивостью к стрептомицину имели средние размеры (от 30 до 50 тпн), большинство из них были способны трансформировать какой-либо из использованных реципиентных штаммов бактерий, а одна из этих плазмид обладала способностью к конъюгации. Интересно, что при переносе плазмид в реципиентные штаммы (у трех из четырех плазмид) вместе с детерминантами устойчивости к стрептомицину наблюдали перенос детерминант устойчивости и к другим антибиотикам, по-видимому расположенных на этих же плазмидах ( табл. 2 ).
Следует отметить, что мелких плазмид широкого круга хозяев, сходных с плазмидами типа RSF1010, ни в одном случае выявить не удалось.
