Липопротеины: определение, ультрацентрифугирование в град-те плотности
Ультрацентрифугирование в ступенчатом градиенте плотности, который готовят путем последовательного наслаивания одного на другой растворов разной плотности, позволяет разделять все основные классы липопротеинов в одном опыте ( Kelley J.L. ea, 1986 ).
Такое центрифугирование проводят в роторах с подвесными стаканами и используют часто для выделения подклассов ЛПНП.
Одно из последних нововведений - применение вертикального ротора -дает возможность существенно уменьшить время, необходимое для разделения липопротеинов с помощью ультрацентрифугирования в градиенте плотности ( Chung B.H. ea, 1986 ).
При проведении данной процедуры вначале повышают плотности плазмы. Для этого к ней добавляют определенное количество кристаллического бромистого калия, рассчитанное по формуле, учитывающей парциальный объем этой соли ( Hatch F.T. ea, 1968 ). Сверху наслаивают менее плотный раствор хлористого натрия. Пробирки с таким, двухступенчатым градиентом помещают в вертикальный ротор и затем в ультрацентрифугу. снабженную специальными механизмами, обеспечивающими медленные начало и конец вращения. В зависимости от размера ротора время центрифугирования варьирует, например, при выделении ЛПНП от 40 мин до 2,5 часов. Данный метод успешно используется также для получения частиц ЛП(а), которые имеют плотность, занимающую промежуточное место между плотностями ЛПНП и ЛПВП ( рис. 3.2 ).
