ЛФХ: ингибирование повышения концентрации внутриклеточного кальция
[ Korotaeva, ea 1997 ] наблюдали ингибирующее влияние ЛФХ на гормонзависимое повышение внутриклеточного Са#2+ в тромбоцитах , которое, вероятно, также реализуется путем разобщения рецепторов или кальциевого канала с G-белками. Последнее предположение вытекает из фармакологических исследований на тромбоцитах, нагруженных флуоресцентным зондом Fura-2 . Оказалось, что инкубация таких тромбоцитов с ЛФХ (1-10 мкМ) в течение 2 мин перед воздействием ФАТ почти полностью подавляла повышение содержания внутриклеточного Са#2+, вызываемое этим индуктором. Концентрации ЛФХ, при которых наблюдалось полумаксимальное ингибирование, составляли 2-4 мкМ.
Ингибирующее влияние ЛФХ на ответы тромбоцитов зависело от структуры этого лизофосфолипида. Мы установили, что лизофосфатидилэтаноламин не влиял на эффект ФАТ и не предотвращал ингибирующего действия ЛФХ. Фосфатидилхолин - метаболический предшественник ЛФХ - также не оказывал никакого воздействия на ФАТ-активируемый подъем уровня внутриклеточного Са#2+ в тромбоцитах и не влиял на ингибирующее действие ЛФХ. Таким образом, для проявления ингабирующего эффекта, по-видимому, важны отсутствие жирнокислотного остатка в положении 2, а также наличие остатка холина в гидрофильной части молекулы фосфолипида [ Korotaeva, ea 1997 ].
ЛФХ в концентрации 10 мкМ полностью ингибировал подъем уровня Са#2+ в тромбоцитах под действием ADP и тромбина . Известно, что ФАТ, ADP и тромбин реализуют свое агрегационное действие на тромбоциты через активацию фосфоинозитидного обмена , в результате чего резко возрастает внутриклеточная концентрация Са#2+, причем это повышение осуществляется как за счет его входа снаружи, так и высвобождения из внутриклеточных хранилищ [ Авдонин ea 1994 ].
В тромбоцитах ЛФХ, по-видимому, влияет как на гормонзависимый вход Са#2+ в клетки, так и на гормонзависимое высвобождение Са#2+ из внутриклеточных депо. При этом эффект ЛФХ на высвобождение Са#2+ из хранилищ эндоплазматического ретикулума, по-видимому, также связан с его влиянием на проведение сигнала через плазматическую мембрану, а не с проницаемостью внутриклеточных мембран тромбоцитов. Доказательством этого предположения послужили эксперименты с тапсигаргином - специфическим ингибитором Са#2+-АТРазы мембраны эндоплазматического ретикулума, который вызывает пассивный выход Са#2+ из внутриклеточных депо в цитоплазму. Установлено, что ЛФХ незначительно снижал эффект тапсигаргина в среде, содержащей Са#2+, и не влиял на подъем [Са#2+]#цит в тромбоцитах в бескальциевой среде в ответ на тапсигаргин. Хорошо известно, что при действии тапсигаргина сначала происходит выброс Са#2+ из внутриклеточных депо, а затем, по мере опустошения последних, активируется вход Са#2+ из внеклеточной среды [ Sasaki, ea 1993 ].
Таким образом, ЛФХ подавляет именно вход ионов кальция в тромбоциты, обработанные тапсигаргином.
Изучение агрегации тромбоцитов показало, что ЛФХ в концентрации 10-30 мкМ полностью устранял агрегацию, вызываемую ФАТ, ADP и тромбином, но сам по себе не вызывал агрегацию тромбоцитов. ЛФХ не влиял также на агрегацию тромбоцитов, вызванную форбол-миристат-ацетатом и тапсигаргином, которые осуществляют свой эффект по механизму, не связанному c мембранными рецепторами, а также с ионными каналами, активируемыми G-белками. Эти данные свидетельствуют о том, что ингибирующее влияние ЛФХ на гормонзависимое повышение внутриклеточного Са#2+ в тромбоцитах реализуется скорее всего путем действия либо на сам кальциевый канал (ингибирующее действие ЛФХ на вход Са#2+, вызванного тапсигаргином), либо путем разобщения рецепторов с G-белками [ Korotaeva, ea 1997 ].
