C-пептид: методы получения: проблемы и недостатки
Несмотря на многообразие методов получения С-пептида проинсулина человека все они обладают рядом существенных недостатков. Так, целая группа методов получения С-пептида совместно с инсулином основана на микробиологическом синтезе полипептидных конструкций (несущих в своем составе проинсулин и некоторую аффинную часть), которые локализуются в тельцах включения в нерастворимом виде. Выделение таких белков влечет за собой ряд технологических затруднений, связанных с переводом подобных полипептидов в растворимое состояние. Для упрощения процедуры выделения С-пептида целесообразно создание высокоэффективных штаммов-продуцентов белков (несущих в своем составе проинсулин человека), которые находились бы в клетках в растворимом виде. Одним из решений этой проблемы может стать создание генноинженерных конструкций на основе белков-носителей (например, стрептавидина), продукты которых экспрессируются в периплазматическом пространстве клеток в растворимом виде. Кроме этого, с точки зрения технологической эффективности методы получения С-пептида совместно с инсулином являются невыгодными из-за низкого выхода целевого пептида (С-пептида). Существенно повысить выход целевого пептида позволяют методы индивидуального получения С-пептида, в составе слитых белков. При создании подобных конструкций целесообразно использовать принцип мультимерности целевого пептида [ Jonasson P., ea, 1998 , Jonasson P., ea, 2000 ], то есть генноинженерных конструкций, в которых к аффинной компоненте последовательно присоединено некоторое количество мономеров С-пептида по принципу голова-хвост. Кроме этого, аминокислотная последовательность С-пептида (последние две С-концевые аминокислоты Lys-Arg являются катионной парой, узнающейся трипсином) позволяет провести подобное конструирование без использования аминокислотных спейсеров между С- пептидами. Еще одним преимуществом способа получения С-пептида в виде слитой генноинженерной конструкции с белком-носителем (по сравнению со способами получения С-пептида совместно с инсулином) является отсутствие в технологическом цикле стадии обработки продуктов протеолиза трипсином карбоксипептидазой В - достаточно дорогого фермента. Таким образом, существуют все предпосылки для микробиологического получения С-пептида не только совместно с инсулином, но и индивидуально. Однако большинство компаний до сих пор продают препараты С-пептида, полученные в результате химического синтеза. Возможно, что такое положение вещей объясняется теми недостатками микробиологического получения С-пептида, которым посвящена последняя часть статьи.
