Белки мембранные: направленное мечение
В отличие от эритроцитов человека, имеющих только плазматическую мембрану, клетки с ядром содержат множество внутренних мембран : мембраны эндоплазматического ретикулума , мембраны аппарата Гольджи , мембраны митохондрий , мембраны лизосом и мембраны разнообразных пузырьков .
На долю плазматической мембраны часто приходится менее 1О% общей площади всех мембран этих клеток. Поэтому такие мембраны можно изучать только после их отделения от внутренних мембран. Однако хорошей очистки достигнуть весьма трудно. Альтернативный подход заключается в использовании реагентов, осуществляющих направленное мечение белков и не способных проникать через мембраны. С помощью таких реагентов можно метить и, таким образом, идентифицировать только те белки, которые выходят на поверхность клетки. В результате применения этого метода мечеными оказываются многие белки плазматической мембраны , тогда как белки, растворенные в цитоплазме , или белки, связанные с внутренними мембранами , не метятся. Для такого направленного мечения широко используется фермент лактопероксидаза , которая окисляет радиоактивный иодид в присутствии перекиси водорода и переводит его в более реакционноспособную, связанную с ферментом форму. Эта активированная форма иодирует боковые группы тирозина и гистидина в других белках. Однако активная форма иода не может высвободиться из лактопероксидазы, а крупная молекула фермента сама по себе не способна проникнуть через мембрану; поэтому в неповрежденных клетках иодироваться будут только белки, выступающие на наружную поверхность (рис.6-32). Эксперименты по направленному мечению показали, что плазматическая мембрана типичной клетки, имеющей ядро , как правило содержит гораздо больше различных белков, чем мембрана эритроцитов человека.
