ДНК-полимераза альфа: общие сведения
ДНК-полимераза альфа - первая ДНК-полимераза, обнаруженная в клетках эукариот. С этим ферментом связана наибольшая полимеразная активность в экстрактах пролиферирующих клеток в стандартных условиях тестирования на активированной ДНК.
Уровень активности ДНК-полимеразы альфа наиболее высок в активно пролиферирующих клетках и низок в непролиферирующих, что согласуется с участием фермента в репликации ДНК [ Wang T.S.-F., 1991 ]. С уровнем активности (и количеством фермента) коррелирует количество транскриптов отдельных субъединиц фермента. Значительный запас ДНК-полимеразы альфа накапливается в яйцеклетках иглокожих, амфибий, костистых рыб и дрозофилы для обеспечения интенсивной репликации ядерной ДНК в ходе раннего развития.
Изоэлектрическая точка фермента находится в диапазоне рI 5.5-6.2.
ДНК-полимераза альфа ингибируется афидиколином , сульфгидрильными реагентами, аналогами нуклеотидов BuAdATP и BuPhedGTP (чем отличается от ДНК-полимераз дельта и эпсилон ) и не ингибируется d2TTP ( табл. 1 ).
ДНК-полимераза альфа является ДНК-зависимым ферментом и не использует в качестве матрицы поли(А). Оптимальная матрица для нее - ДНК, активированная ДНКазой. Четырехсубъединичная ДНК-полимераза альфа эффективно использует матрицы с высокой концентрацией праймера, однако в случае матриц, содержащих протяженные однонитевые участки, эффективность ее низка. Это согласуется с данными о невысокой процессивности фермента в условиях in vitro. При связывании с праймер-матричным комплексом ДНК- полимераза альфа защищает от гидролиза ДНКазой I участок праймера размером 9 н., дуплексный участок матрицы размером 13 н. и однонитевой участок матрицы размером 14 н. [ Thompson H.C. et al., 1995 ]. Близкие размеры участка связывания ДНК-полимеразы альфа в праймер- матричном комплексе определены с помощью химической модификации отдельных нуклеотидных остатков в составе матрицы и праймера [ Лаврик О.И., Невинский Г.А., 1989 ].
Pol альфа, Pol эпсилон и Pol дельта - три ДНК-полимеразы, являющиеся членами В-семейства полимераз, необходимы для репликации хромосом.
