Простагландин-H2 D-изомераза: структура
Определена первичная структура глутатион-независимой простагландин-H2 D-изомеразы из мозга крысы ( Urade, 1989 ). Белковая часть фермента представляет собой полипептид, состоящий из 188 (по другим данным 189) аминокислотных остатков с рассчетным значением молекулярного веса 21.232kDa. Установлено два сайта гликозилирования , соответствующих аминокислотным остаткам 51-53 (-Asn-Ser-Ser-) и 78-80(-Asn-Leu-Thr-), с которыми были связаны полисахариды с молекулярным весом 3kDa каждый. Обработка нативного фермента N-гликаназой приводила к образованию двух изоферментов с молекулярным весом 20kDa и 23kDa. Показано, что углеводородная часть простагландин-H2 D-изомеразы и 20 аминокислотных остатков NH2-конца не существенны для проявления каталитической активности PGH-PGD изомеразы. Аминокислотный состав нативного фермента показывает, что около 20 гидрофобных остатков на NH2-конце подвержены посттрансляционному удалению в качестве сигнальных пептидов, наличие которых характерно для ряда мембранных белков.
Была исследована роль остатков Cys для поддержания определенной пространственной структуры и для каталитической функции фермента ( Urade, 1995 ). С этой целью были получены рекомбинантные по Cys65, Cys89 и Cys186 белки. Они характеризовались, как и нативный фермент, наличием высокорегулярной бета-структуры. Обнаружено, что только те мутантные белки, в которых был замещен Cys65, не обладали ферментативной активностью. Таким образом, становится ясным, что для осуществления неокислительной перегруппировки 9,11-эндопероксидной группы в молекуле PGH2 необходимо наличие внутренней (Cys65) и внешней (дитиотреитол, GSH ) сульфгидрильных групп.
