Простациклин синтаза: общая характеристика
Простациклин синтаза [(5Z,13E)-(15S)-9альфа,11aльфа-эпидиокси-15- гидроксипростa-5,13-диеновая кислота 6-изомераза, ЕС 5.3.99.4 ]
Большинство работ, посвященных исследованию простациклин синтазы, были выполнены с использованием в качестве источника фермента аорты быка. Простациклин синтаза является мембранным гемопротеидом цит.P-450 типа .
Простациклин синтаза из аорты быка была выделена D.DeWitt ( DeWitt, 1983 ) с помощью иммуноафинной хроматографии (моноклональные антитела, связанные с Affi Gel 10) и B.Pereira ( Pereira, 1993 ), использовавшим для очистки хроматографию на колонке с Sephacryl S-300 и Mono Q. В обоих случаях молекулярный вес субъединицы выделенного фермента был определен равным 52kDa. B.Pereira ( Pereira, 1993 ), основываясь на результатах хроматографического и электрофоретического анализов, а также определения N-концевой аминокислотной последовательности, предположил, что простациклин синтаза в микросомах аорты быка представлена несколькими белками.
Простациклин синтаза содержит гемовую группу , необходимую для проявления ферментом активности. Спектр поглощения нативного фермента характеризуется максимумом поглощения при 418-420нм ( DeWitt, 1983 ). В присутствии дитионита Na гемовая группа простациклин синтазы способна образовывать комплекс с CO, характеризующийся максимумом при 450нм ( Ullrich, 1981 ) (по другим данным - 440нм; DeWitt, 1983 ), что и позволило отнести простациклин синтазу к группе белков цит. P-450 типа.
Многочисленные кинетические исследования были проведены с использованием интактных и солюбилизированных неионными детергентами микросом аорты быка. Простациклин синтаза характеризовалась широким pH- оптимумом, лежащим в пределах 6 - 8.5. Значение KM , рассчитанное для основного физиологического субстрата простациклин синтазы, PGH2 , оказалось равным 5-10мкМ.
