Тромбоксан синтаза: общая характеристика
Тромбоксан синтаза [(5Z,13E)-(15S)-9aльфа,11aльфа-эпидиокси-15- гидроксипростa-5,13-диеновая кислота тромбоксан A2-изомераза, ЕС 5.3.99.5 ].
Выделенная из тромбоцитов человека тромбоксан синтаза ( TX синтаза ) представляет собой мембранный односубъединичный гемопротеин с молекулярным весом 58.8kDa ( Hauraund, 1995 ). Определение спектральных характеристик фермента позволило идентифицировать его как гемопротеин цит.P-450 типа ( Hauraund, 1995 ).
TX синтаза локализована в микросомальной фракции тромбоцитов человека и может быть солюбилизирована различными неионными детергентами (Triton X- 100, Tween-20, Lubrol PX) практически без потери активности ( Hauraund, 1995 ). Hauraund ( Hauraund, 1995 ) описан метод получения гомогенного препарата TX синтазы тромбоцитов человека путем солюбилизации TX-синтазной активности смесью детергентов Lubrol PX и холата и пятистадийной хроматографической очистки. Выделенный фермент содержал 0.9 моль гема в рассчете на одну молекулу белка.
Оптические и EPR характеристики выделенного фермента позволяют отнести его к группе цит.P450 белков. В присутствии дитионита натрия и CO он образует хромофор с максимумом поглощения при 450 нм. Образование хромофора подавляется специфическим ингибитором TX синтазы, CGS-13080 .
Соотношение TX-синтазной активности и количества цит.P450 в препаратах фермента не менялось в ходе очистки, что свидетельствует о том, что TX синтаза является основным цит.P450 в микросомах тромбоцитов человека. Каталитическая константа скорости реакции изомеризации PGH2 для TX синтазы была определена равной 1628 мин-1. Исследование восстановления гема TX синтазы дитионитом натрия и NADPH-зависимой цит.P-450 редуктазой показало, что выделенный фермент по ряду спектральных характеристик отличается от неспецифических монооксигеназ печени . Кроме того, TX синтаза не проявляет 7-этоксикумарин монооксигеназной активности, а микросомы из печени не обладали TX-синтазной активностью.
Легкие также являются богатым источником TX синтазы. Гомогенный препарат TX синтазы был выделен из легких свиньи ( Shen, 1986 ). Фермент был очищен в 624 раза с использованием трехстадийной очистки, включающей иммуноафинную хроматографию на колонке с иммобилизованными моноклональными антителами. Очищенный фермент был охарактеризован как односубъединичный гемопротеид с молекулярным весом полипептидной цепи 53 kDa (электрофорез с SDS) и максимумом поглощения при 418 нм. Катализируемая TX синтазой из легких свиньи реакция изомеризации PGH2 характеризовалась KM , pH оптимумом и температурным оптимумом, равными 12мкМ, 7.5 и 30 градусам C, соответственно. Показано, что TX синтаза, выделенная из легких свиньи, по своим антигенным свойствам близка к ферменту тромбоцитов человека ( Shen, 1986 ).
