NO-синтазы: регуляция активности
Клеточная активность конститутивных (нейронного и эпителиального) изотипов NO-синтазы регулируется внутриклеточной концентрацией кальция . Фермент активен только после димеризации субъединиц, которая инициируется связыванием одной молекулы СаМ с каждым мономером ( рис. 3 ) [ Marletta ea 1994 , Nathan ea 1994 , Nathan ea 1994 ].
В димере субъединицы соединены антипараллельно, при таком расположении происходит попарное сближение С-концевых редуктазных с N-концевыми оксигеназными доменами. Сближение каталитических центров делает возможным перенос между ними электронов, что необходимо для окисления аргинина. В форме мономера изомеры NO-синтазы способны окислять NADPH и переносить электроны на цитохромы с и Р-450 [ Klatt ea 1996 , Rafferty ea 1996 ].
Характерная особенность индуцибельного изофермента iNOS состоит в высоком сродстве к СаМ, вследствие чего для образования активного холофермента достаточно фоновой (около 100 нМ) внутриклеточной концентрации Са [ Marletta ea 1994 , Nathan ea 1994 ]. На активность iNOS в относительно большей степени, чем на другие изоферменты, влияет клеточная концентрация тетрагидробиоптерина [ Abu-Soud ea 1995 ]. Связывание с этим кофактором необходимо для димеризации субъединиц iNOS. В регуляции активности NO-синтаз участвуют протеинкиназы.
Фосфорилирование изоферментов NO-синтазы протеинкиназой CQ обратимо ингибирует ферментативную активность [ Dawson ea 1993 , Riccio ea 1996 ]. Тем не менее в клетках, где происходит экспрессия гена Са2+ -независимого изофермента iNOS, выработка окиси азота зависит прежде всего от уровня транскрипции мРНК iNOS, тогда как аллостерическая регуляция и модификация фермента выполняют вспомогательную функцию [ Nathan ea 1994 ].
