РНК: локализующие последовательности
Для исследования механизмов направленной доставки РНК к местам ее внутриклеточной локализации используют гибридные РНК, содержащие изучаемые и маркерные последовательности. В качестве маркерной последовательности применяют 5'-концевой фрагмент мРНК бета-галактозидазы E. coli , которую обнаруживают в клетках in situ с помощью соответствующих антисмысловых гибридизационных зондов. Делеции, которые приводят к делокализации изучаемых РНК, также позволяют находить последовательности, направляющие РНК в определенные зоны цитоплазмы. У дрозофилы внутриклеточное поведение гибридных и мутантных РНК чаще всего исследуют у трансгенных мух. Для введения РНК в клетки также используют прямые инъекции и трансфекцию плазмид, экспрессирующих соответствующие гены.
Для идентификации транс-действующих факторов и их генов применяют три подхода. Первый из них, основанный на получении мутаций, нарушающих внутриклеточную локализацию РНК, используют для дрозофилы и S. cerevisiae. После создания мутантов осуществляют поиск и клонирование мутантных генов. При втором подходе исследуют факторы, специфически взаимодействующие с изучаемыми РНК. Наконец, обнаружение белков или РНК со специфической внутриклеточной локализацией также открывает путь к исследованию их генов.
