Методы получения гибридов и анализ сцепления генов
Для картирования генов человека обычно исследуовали гибриды между нормальными диплоидными клетками человека и анеуплоидными клетками грызунов. Как уже было сказано выше, Вейс и Грин [ Weiss ea 1967 ] показали, что в ходе культивирования гибридов между диплоидными клетками человека ГФРТ* ТК* и анеуплоидной мышиной линией В82 ГФРТ* ТК- на среде HAT происходит постепенная потеря почти всех хромосом человека за исключением одной, которая всегда присутствовала у гибрида. Все мышиные хромосомы сохранялись. Поскольку на среде HAT способны были выживать только клетки с нормальной тимидинкнназой, а она была привнесена клетками человека, то очевидно, что ген ТК был локализован в той хромосоме, которая всегда сохранялась у гибридов. Есть много примеров сохранения у гибридов между клетками человека и грызунов всего одной хромосомы человека [ Сrace ea 1979 , Jones ea 1981 , Kiss C., 1997 ].
Однако не всегда в ходе культивирования гибридов остается только одна хромосома человека. В таких случаях надо иметь панель гибридов с разными наборами хромосом человека и размножать их в селективных условиях. Тогда конкордантность выживания гибридных клеток с присутствием одной и той же хромосомы во всех гибридных клонах будет свидетельствовать о локализации изучаемого гена в этой хромосоме [ Inui ea 1985 , Wagner ea 1997 ].
Поскольку элиминация хромосом человека у гибридов - процесс достаточно длительный, применяют некоторые методы его ускорения. Одним из таких методов является слияние клеток грызунов с так называемыми микроклетками человека .
Возможен также метод переноса генов с помощью изолированных хромосом путем совместного культивирования с клетками реципиента. При переносе генов с помощью изолированных хромосом возможен совместный перенос тесно сцепленных, синтенных, генов [ Spandidos ea 1977 ]. Таким способом на среде HAT показан совместный перенос ТК-гена человека, локализованного в хромосоме 17, и гена галактокиназы в мышиные клетки [ Willecke ea 1976 ].
