Антибактериальная активность антибиотиков и SOS-ответ
Определение антибактериальной активности антибиотиков и демонстрация SOS-ответа.
Для определения антибактериальной активности клеток-продуцентов микроцина, колонии клеток-продуцентов выращивались на чашках с агаризованной средой М63 в течение суток и затем заливались раствором 0.6% агара в дистиллированной воде, содержащего 100 мкл насыщенной ночной культуры тестерного штамма E. coli B в среде М63. Чашки инкубировались в течение ночи при комнатной температуре. Вокруг колоний клеток, производящих микроцин, образовывались гало ингибирования роста.
Концентрация очищенных микроцинов "Х" и "N" определялась спектрофотометрически по описанному методу Sinha Roy et al. Вещества разводились до концентраций 1-100 мкМ в 50% MeCN и 2 мкл капли наносились на свежезалитые газоны тестерных штаммов E. coli. В качестве контроля использовался 100 мкМ раствор ципрофлоксацина (CFX) в 50% MeCN. Для приготовления газонов чашки с агаризованной (1.5%) минимальной средой М63 заливались 5 мл 0.6% раствора агара в дистиллированной воде, содержащего 100 мкл насыщенной ночной культуры используемого штамма E.coli в среде М63. Чашки инкубировались при комнатной температуре в течение ночи.
Для демонстрации SOS-ответа по описанной выше методике готовили газон клеток E. coli CSH50 лямбда sfiA::lacZ на поверхности агаризованной среды MacConkey (Difco). На чашки наносились 2 мкл капли 10 мкМ растворов микроцинов "Х", "N" и ципрофлоксацина, и 100 мкМ раствора микроцина С. Чашки инкубировались сутки при комнатной температуре.
