Электрофорез ДНК в агарозном геле
Аналитический электрофорез в агарозном геле: после проведения реакции продукт ПЦР аплификации (2-5 мкл) смешивали с 1 мкл буфера для нанесения и наносили на гель для электрофореза. Электрофорез проводили в 1% агарозе с добавлением бромистого этидия (0,4 мкг/мл) при 100V в буфере TAE. ДНК визуализировали при помощи УФ и фиксировали результаты в цифровом виде.
Препаративный электрофорез в агарозном геле: продукты ПЦР амплификации (50 мкл) смешивали с 5 мкл буфера для нанесения и наносили на гель. Электрофорез проводили в 1% агарозе с добавлением бромистого этидия (0,4 мкг/мл). Для выделения ДНК, полосу, соответствующую продукту амплификации, визуализированную при помощи УФ, вырезали из агарозного геля, помещали в пробирку объемом 1,5 мл и проводили выделение ДНК, используя набор реактивов "Gel Extraction Kit" фирмы Qiagen согласно протоколу фирмы- производителя.
Определение концентрации ДНК, выделенной из агарозного геля: 2 мкл раствора выделенной ДНК анализировали на агарозном геле. Количество продукта оценивали по интенсивности флуоресценции в УФ по сравнению с маркером с известной концентрацией ДНК.
