Гомеобоксные гены: временной паттерн экспрессии in vitro
Согласно данным Simeone ea (1990) , дифференцировка клеток эмбриональной карциномы линии NT2/D1 индуцируется РК, причем это сопровождается индукцией генов HOX . Максимальная экспрессия генов Hox 2 на 5'-конце кластера (от Hox 2E до Hox 2A) наблюдалась при концентрации РК 5*10 (-6) М, тогда как гены 3'-концевой области (Hox 2F, Hox 2H и Hox 2I) наилучшим образом реагировали на концентрацию 10 (-8) М. Hox 2G, однако, реагировал аномальным образом и наиболее типично для 5'-группы. При концентрации РК 10 (-5) М Hox 2H и Hox 2I быстро индуцировались (максимум - через 24 часа), тогда как другие гены активировались последовательно от Hox 2G до Hox 2E между 1-м и 4-м днями. При концентрации РК 10 (-8) М индуцировалась только 3'-группа, более медленно, но сходным образом. При концентрации РК 10 (-5) М транскрипты Hox 2H и Hox 2I быстро и равномерно накапливались, достигая максимальных значений после 24 часов воздействия РК. Акивация других генов происходила последовательно от 2G до 2E между 1-м и 4-м днями индукции РК. Уровень в 50% от максимального накопления РНК был достигнут за 14 часов для 2I и 2H, за 60 часов - для 2G, 2F и 2A, 70 часов - для 2B, 90 часов - для 2C, 115 часов - для 2D и 180 часов - для 2E ( Simeone et al., 1990 ).
В следующей работе Simeone с соавторами (1991) изучалась экспрессия 38 генов hox из всех четырех семейств в линии клеток эмбриональной карциномы человека NT2/D1 после различных временных воздействий, от 1 до 195 часов, в постоянном присутствии РК в концентрации 10 (-5) М.
HOX 1 : Экспрессия большинства 5'-генов, Hox-1J, -1I, -1H и -1G, не индуцируется РК в клетках NT2/D1. Примечательно, что накопление транскриптов наиболее раннего из активируемых генов Hox-1F достигает уровня плато в течение 24 часов, а затем снижается, начиная со 150 часов ( Рисунок 4 ). Похожий временной профиль был выявлен для мышиного гомолога Hox-1F, гена Hox-1.6 в клетках F9 ( La Rosa & Gudas, 1988 ).
HOX 3 cluster : Четыре гена от -3F до 3B остаются выключенными в клетках, тогда как ближайший к 5'-концу ген, Hox-3G, проявляет незначительную экспрессию. Он слабо экспрессируется в неиндуцированных клетках и сохраняет тот же экспрессионный уровень при обработке РК с последующим снижением после 150 часов. Характерно, что этого снижения не происходит в клетках, обработанных РК в более низкой концентрации, т.е., 10 М.
HOX 4 cluster : Напротив, четыре гена 5'-концевой области, Hox-4I, -4H, -4F и -4D, проявляют иной уровень экспрессии. Они слабо экспрессируются в неиндуцированных клетках, и уровень их экспрессии постепенно падает после обработки РК. Как уже установлено для Hox-3G, эти четыре гена экспрессируются на постоянном уровне при обработке РК в концентрации 10 (-7) М. Наконец, Hox-4C, расположенный на границе между двумя группами 5'- и 3'-генов конститутивно экспрессируется на очень низком уровне.
