Легионеллез: диагностика
Лабораторные методы диагностики болезни легионеров представлены в табл. 153.2 . Для исследования обычно используют мокроту, а если ее нет - проводят бронхоскопию или бронхоальвеолярный лаваж. Чувствительность исследования мокроты и смывов, полученных путем бронхоскопии, примерно одинакова; чувствительность исследования жидкости, полученной при бронхоальвеолярном лаваже, еще выше. При наличии плеврального выпота показана плевральная пункция. Проводят иммунофлюоресцентное окрашивание и посев выпота, а также определяют в нем антиген Legionella pneumophila .
Микроскопия. Обнаружение возбудителя в биологических жидкостях, в норме стерильных (например, в плевральной жидкости), а также в ткани легких позволяет предположить диагноз. В окрашенных по Граму мазках мокроты обычно видны только лейкоциты, а возбудитель не обнаруживается. Если же легионеллы в них различимы, это - мелкие, полиморфные, слабо окрашенные грамотрицательные бактерии. Legionella micdadei частично кислотоустойчива. Из-за этого больным по ошибке могут назначить противотуберкулезную терапию. Модифицированная окраска по Цилю-Нильсену, при которой для обесцвечивания вместо 3% соляной кислоты используют 1% серную, увеличивает частоту обнаружения Legionella micdadei .
Посев. Посев мокроты и других биологических материалов позволяет поставить окончательный диагноз легионеллеза. Наибольшую чувствительность обеспечивает угольно-дрожжевой агар, в который добавляют антибиотики и красители. Колонии легионелл растут медленно; невооруженным глазом их можно различить только через 3-5 сут. Чтобы предотвратить зарастание агара другими видами бактерий, образец предварительно прогревают или обрабатывают кислотой. Legionella pneumophila часто обнаруживается в мокроте, в которой нет нейтрофилов. Ее удается выделить даже из образцов, в которых содержится более 25 эпителиальных клеток в поле зрения при сильном увеличении (признак загрязнения мокроты микрофлорой полости рта).
Иммунофлюоресцентное окрашивание. Метод прямой иммунофлюореспенции быстр и высокоспецифичен, но менее чувствителен, чем посев, так как для положительного результата нужна значительная концентрация бактерий в материале. В начале заболевания этот метод менее результативен.
Серодиагностика. Серологические исследования желательно проводить в острой стадии и в стадии выздоровления. Диагностическим считается четырехкратное повышение титра антител. Сероконверсия обычно выявляется через 4-12 нед. У некоторых больных она так и не происходит. Если серологическое исследование было однократным, титр антител 1:128 и выше у больного пневмонией позволяет поставить предположительный (но не окончательный) диагноз. Серодиагностика используется в основном в эпидемиологических исследованиях. Ее специфичность в отношении видов, отличных от Legionella pneumophila , неизвестна. Описаны перекрестные реакции с антителами к некоторым грамотрицательным палочкам.
Определение антигена Legionella pneumophila в моче. Определение свободного антигена Legionella pneumophila в моче - быстрый, легкий, относительно дешевый и высокоспецифичный метод диагностики. По чувствительности он уступает только посеву ( табл. 153.2 ). Этот метод позволяет выявить только штаммы Legionella pneumophila серогруппы 1, но 80% случаев легионеллеза вызываются именно ими. Антиген появляется в моче через 3 сут после начала заболевания (даже на фоне антимикробной терапии) и держится в ней на протяжении нескольких недель. Метод следует освоить каждой клинической лаборатории.
ПЦР. Использование олигонуклеотидных зондов в сочетании с ПЦР по специфичности превосходит другие методы. Метод с успехом применяют для идентификации легионелл в пробах воды. Проводится оценка его чувствительности при исследовании клинического материала.
