Микроорганизмы: идентификация, олигонуклеотидные зонды, введение
Метод олигонуклеотидных зондов занял прочное место в лабораторной диагностике бактериальных, вирусных, грибковых и паразитарных инфекций. В основе метода лежит выявление специфических участков ДНК и РНК данного микроорганизма. Зонд представляет собой короткий фрагмент ДНК с уникальной последовательностью нуклеотидов, меченный хромогеном, изотопом или другим сигнальным веществом. Если нуклеотидные последовательности зонда и одноцепочечной нуклеиновой кислоты комплементарны, происходит их связывание друг с другом (гибридизация).
Исследуемые микроорганизмы не обязательно должны быть живыми, поэтому метод особенно ценен для идентификации возбудителей, не поддающихся культивированию. К настоящему времени разработано много диагностических методик, часть которых рекомендована FDA для клинической микробиологии. Перед исследованием надо лизировать клетки микроорганизма и перевести ДНК в одноцепочечную форму путем денатурации. Гибридизацию проводят на твердой подложке или в растворе, в зависимости от применяемой методики. Гибридизация in situ удобна для выявления возбудителя в образцах тканей. После связывания зонда с комплементарной нуклеотидной последовательностью выявляют полученный комплекс - непосредственно (прямое определение) или путем амплификации , то есть предварительного усиления биологического сигнала ( рис. 121.1 ).
