Энтеровирусные инфекции: диагностика
Обычно для подтверждения диагноза энтеровирусной инфекции вирус выделяют в культуре клеток. Хотя вирус из кала, отделяемого носоглотки и мазков из зева выделяют часто, это не всегда доказывает его этиологическую роль, так как возможна сопутствующая бессимптомная инфекция, при которой вирус выделяется неделями. Выделение энтеровирусов из зева более ценно для подтверждения диагноза, чем выделение из кала, так как при бессимптомной инфекции энтеровирусы в зеве содержатся не столь длительно. Из СМЖ, крови, плевральной или перитонеальной жидкости и тканей энтеровирусы выделяют значительно реже, но это всегда подтверждает их этиологическую роль. Иногда вирус удается выделить только из крови или СМЖ, поэтому важно брать разные пробы для культивирования. Вирусы чаще удается выделить в начале заболевания.
Большинство энтеровирусов человека удается выявить в течение недели после заражения культуры клеток. Причиной неудачи при выделении вируса может быть присутствие нейтрализующих антител, недостаточная восприимчивость культуры клеток к вирусу или неправильное хранение пробы. Для выделения вирусов Коксаки A нужны специальные линии клеток или заражение новорожденных мышей.
Серотипирование имеет преимущественно эпидемиологическое значение. В клинической практике его проводят только для выяснения этиологии тяжелых вспышек и дифференцирования вакцинных и диких штаммов вируса полиомиелита у больных. При подозрении на полиомиелит обязательно берут кал и мазок из зева для выделения вируса и парные сыворотки. При поражении ЦНС , если из СМЖ вирус выделить не удалось, диагноз полиомиелита обычно подтверждают выделением вируса из кала в первые две недели заболевания. Выделенный штамм вируса пересылают в Центр по контролю заболеваемости в Атланте для идентификации его как дикого или вакцинного.
Для идентификации вирусной РНК в СМЖ, сыворотке и тканях используют ПЦР. Высокая степень гомологии на 5'-конце РНК у разных серотипов энтеровирусов человека позволяет идентифицировать большинство из них (более 92%) одной парой праймеров. При правильном контроле этот метод исследования высокочувствителен (95% и выше) и специфичен (почти 100%). Он быстрее дает результаты, чем выделение вируса в культуре, и, вероятно, более чувствителен.
ПЦР особенно ценна в диагностике и оценке течения энтеровирусных инфекций у больных с иммунодефицитом , получающих нормальные иммуноглобулины (у этих больных серологические методы недостоверны, а выделение вируса в культуре может быть неудачным).
Выявление вирусных антигенов и гибридизация нуклеотидных последовательностей энтеровирусов с помощью специфических зондов возможны также in situ, но эти методы по чувствительности уступают ПЦР.
Серологические методы применяют редко из-за обилия серотипов и отсутствия у них общего антигена. Обычно их используют только в эпидемиологических исследованиях. Редко парные сыворотки для выявления нарастания титра антител исследуют также для подтверждения этиологической роли выделенного в культуре вируса. Первую пробу сыворотки берут в начале заболевания и замораживают, вторую - примерно 4 нед спустя. Реакция нейтрализации является более точным методом определения титра антител, чем реакция связывания комплемента. Титр специфических IgM повышен как при острой, так и при хронической инфекции.
