Mycoplasma hyorhinis: вариабельные липопротеины Vlp
В серии работ по анализу поверхностных структур Mycoplasma hyorhinis было выявлено несколько групп белков ( Boyer, Wise, 1989 ; Rozengarten, Wise, 1990 , Rozengarten, Wise, 1991 ). Антигены внутри группы имели общий эпитоп, но существенно различались по своим свойствам:
1) после ряда пассажей на жидкой среде и последующего анализа с использованием иммуноблотинга та или иная группа белков, связанных с определенным антигеном, могла либо присутствовать, либо отсутствовать у одного и того же штамма; более того, если одни изоляты экспрессировали несколько групп белков, связанных с соответствующим антигеном, то другие экспрессировали лишь одну, и это различие сохранялось в течение ряда пассажей;
2) у некоторых штаммов были обнаружены антигены, имеющие одинаковый эпитоп, но различающиеся по своим размерам. У некоторых штаммов соответствующие антигены были выявлены на иммуноблоте в виде характерной "лестницы", каждая ступень которой представляла собой антиген определенного размера, отличающийся от "верхнего" и "нижнего" на одну и ту же величину.
Вариабельные антигены M. hyorhinis являются липопротеинами (Vlp), интегрированными липидной частью в наружную поверхность клеточной мембраны. Расположение Vlp выявлено в результате обработки интактных клеток протеолитическими ферментами и анализа их с помощью иммуноэлектронной микроскопии. Молекула Vlp имеет периодическую структуру с эпитопом (узнаваемым антителами) в каждом повторе, ее С- концевая пептидная часть располагается над мембраной.
По размерам колоний популяция M. hyorhinis была разделена на три фенотипа, которые воспроизводились в определенном соотношении: S (мелкие) - 98.6%, М (средние) - 1.3%, L (крупные) - 0.1%. Путем клонирования можно было выделить сублинии определенного морфотипа по размеру колоний, но в этих сублиниях достаточно часто обнаруживались изменения соответствующего морфотипа на альтернативные. Частота таких "переключении" (на клетку, на поколение) варьировала от 10^-4 до 10^-2, а у некоторых сублиний достигала 3 10^-2. При этом можно было обнаружить "секторные" колонии, комбинированные (по секторам) из клеток различных морфотипов. Подобная гетерогенность популяции была обнаружена и в отношении экспрессии различных поверхностньк антигенов, и частота "переключении" экспрессии с одного антигена на другой была столь же высокой. С помощью электрофореза в геле и последующего иммуноблотинга с использованием различных моноклональных антител были выделены три типа антигенов Vlp (обозначенные VlpA, VIpB и VIpC), каждый из которых обладал высокой частотой изменчивости как по размерам молекул, так и по наличию/осутствию экспрессии ( Rozengarten, Wise, 1990 , Rozengarten, Wise, 1991 ).
Изучение экспрессии антигена VIpC позволило выявить упорядоченность его гетерогенности. На иммуноблоте он проявлялся в виде лестницы с интервалом между ступенями, соответствующим 2.8 кДа. При последующем клонировании были получены сублинии, экспрессирующие VIpC одного определенного размера, которые в совокупности должны составлять "лестницу" родительского штамма. Однако каждая из выделенных, казалось бы изогенных, популяций через некоторое количество пассажей начинала экспрессировать VIpC полного набора размеров. Анализ VIpB позволил обнаружить наличие сходной с VIpC "лестницы", но с "шагом" около 2.3 кДа. Кроме того, обнаружилось еще одно отличие между VIpC и VIpB: если для первой группы размеры экспрессируемых сублиниями липопротеинов были равны таковым в составе "лестницы", то во втором случае спонтанно возникающие варианты разноразмерных молекул не соответствовали ни одной ступени "лестницы" родительского штамма. Размер мономера VlpA оказался больше чем VIpB и VIpC. Несмотря на различия в структуре и размерах мономеров между VIpB и VIpC, одно из моноклональных антител реагировало и с тем, и с другим, что указывало на присутствие у них общего эпитопа.
Клетки микоплазм каждой из сублиний могут экспрессировать либо один из трех Vlp (А, В или С), либо два из них или же все три вида антигенов соответствующего семейства. Все попытки обнаружить сублинию, не экспрессирующую ни одного из них, оказались безуспешными. Но каждая клетка M. hyorhinis экспрессирует Vlp только одного размера ( Rozengarten, Wise, 1991 ). На основании этих данных авторы пришли к выводу о существовании 7 классов комбинированной экспрессии Vlp. Учитывая, что каждый Vlp может варьировать в размере (и таких вариантов по меньшей мере 12 - у VlpA, 25 - у VIpB и 30 - у VIpC), можно рассчитать, что общее количество вариантов поверхностных антигенов в популяции M. hyorhinis составляет более 9000 ( табл. 4 ).
