Другие способы определения распределения рецепторов ацетилхолина
Другой способ определения распределения рецепторов АХ по поверхности мышечного волокна основан на избирательном и необратимом связывании альфа-бунгаротоксина , содержащегося в змеином яде , с никотиновыми АХ рецепторами . Распределение связывания этого токсина можно наблюдать с помощью гистохимических методик. Например, флуоресцентные метки можно связать с альфа-бунгаротоксином и исследовать распределение рецепторов на флуоресцентном микроскопе ( рис 9.10 А). Связывая альфа-бунгаротоксин с пероксидазой хрена , плотный продукт реакции можно визуализовать на электронном микроскопе ( рис. 9.10 В). Эти эксперименты подтверждили, что рецепторы сконцентрированы непосредственно под окончанием аксона.
Еще более точная количественная оценка концентрации АХ-рецепторов может быть получена с использованием радиоактивного альфа-бунгаротоксина и авторадиографии ( рис. 9.10 С). Плотность рецепторов определяется подсчетом количества гранул серебра в экспонированной эмульсии. Показано, что наибольшая плотность рецепторов на перегибах и верхней трети постсинаптических складок (около 10000/кв.мкм); в экстрасинаптических участках плотность значительно меньше (около 5/кв.мкм). Рецепторы сконцентрированы на постсинаптической мембране также в синапсах центральной и периферической нервной системы.
Нейромедиаторы и другие вещества могут подаваться на нейроны и мышечные волокна также толчками давления, подаваемыми на кончик пипетки. Преимущество такого метода в том, что им можно подавать электрически нейтральные молекулы. Вещества могут также подаваться на клетки или участки мембран с использованием методики очень быстрой замены растворов заданного состава.
