Структура и функции ионного канала
Основной техникой сопоставления функции канала и его структуры является экспрессия ионных каналов в ооцитах Xenopus или в других клетках инъекцией соответствующей мРНК или трансфекцией ДНК с помощью векторов. После этой процедуры можно производить запись электрических сигналов либо от фрагментов мембраны, содержащих одиночные каналы, либо регистрировать токи целой клетки (отображающие поведение всей популяции экспрессированных каналов). Этому помогает то, что интактные ооциты сами не экспрессируют АХР. Однако после введения нуклеиновой кислоты, кодирующей АХР, они не только экспрессируют соответствующие субъединицы белка, но даже чудесным образом обеспечивают их сборку в функционально активные рецепторно-канальные комплексы.
Структура ионного канала может быть изменена сайт-направленным мутагенезом. Для осуществления этой методики необходимо сконструировать мутантную кДНК с мутациями, меняющими какой-либо сайт белка ионного канала. Это позволяет добиться того, что выбранные аминокислоты с присущими им физико-химическими свойствами (положительным или отрицательным зарядом, высокополярные или неполярные) заменяются другими аминокислотами с отличающимися свойствами. Функциональные свойства мутантных каналов могут затем быть изучены после экспрессии этого белка в клетках, в которые была введена мутантная кДНК.
