C-myc: Транскрипции позитивная регуляция
Транскрипция с промоторов Р1 и Р2 может регулироваться независимо друг от друга.
Позитивный элемент, расположенный в участке от -101 до -153, может избирательно стимулировать транскрипцию с промотора Р1\c-myc ( Hay N., Bishop J.M. and Levens D., 1987 ). Как показано для клеток HeLa с помощью метода футпринта, внутри этого фрагмента содержится 5 участков связывания, один из которых содержит последовательность CCCTCCCC, а остальные - мотив C/TCC/TTCCCCA ( Hay N., Bishop J.M. and Levens D., 1987 ).
Сходные мотивы найдены в мышином гене c-myc ( Corcoran L.M., 1985 ).
Этим данным противоречат данные других авторов ( Nishikura H., 1986 ), из которых следует, что первых 60 н.п. достаточно для высокого уровня экспрессии с Р1, что показано с помощью инъекций плазмид с делециями в ооциты Xenopus laevis.
Описано два позитивных регуляторных домена ( рис.2 ), воздействующих как на Р1 c-myc , так и на Р2 c-myc , расположенные в участках -353/-1257 и -1257/-2329 ( Hay N., 1987 ). Показано, что их действие аддитивно. Оба домена содержат гиперчувствительные участки для ДНКазы I ( Hay N., ea, 1987 , Siebenlist U. et al., 1984 ). Они содержат потенциальные места связывания с фактором NF1 ( Nuclear Factor 1 ) - позитивным транскрипционным фактором клеток млекопитающих ( Siebenlist U. et al., 1984 ) ( рис.2 и рис.5 ).
Недавно был обнаружен позитивный транскрипционный элемент, контролирующий транскрипцию с промотора Р2 c-myc . Он находится в участке -142/-115 ( Postel E.H., ea, 1989 ). Регуляторный фактор, так называемый PuF , связывается с нуклеотидной последовательностью GGGTGGG внутри участка -142/-115 ( рис.7 ).
Показано, что продукт аденовирусного гена E1A , являющийся трансактиватором некоторых аденовирусных генов, может вызывать транскрипцию гена c-myc человека ( Hiebert W.S., Lipp M. and Nevins J.R., 1989 ). С помощью трансфекции плазмиды, содержащей промотор c-myc, в клетки HeLa , инфицированные аденовирусом Ad5 , нормальным или дефектным по гену E1A, показали, что транскрипция c-myc происходит только в случае инфекции нормальным вирусом Ad5.
Известно, что E1A-зависимая активация транскрипции аденовирусного гена E2 осуществляется с помощью клеточного белка E2F , узнающего два специфических участка в промоторе гена E2. По-видимому, по той же схеме происходит и регуляция гена c-myc.
Транскрипция гена c-myc может усиливаться при взаимодействии фактора E2F с двумя участками связывания, находящимися между -35 и -42 (I) и -65 (II) , считая от точки инициации транскрипции для промотора Р0 (т.е. практически внутри промоторной области) ( Hiebert W.S., Lipp M. and Nevins J.R., 1989 ).
Мутации в любом из двух участков связывания приводит к потере E1A-индуцированной транскрипции гена c-myc. С помощью опытов по конкуренции двухспиральных олигонуклеотидов, комплементарным сайтам I и II при торможении в геле при взаимодействии с меченым олигонуклеотидом, комплементарным промотору гена E2, показано, что II участок связывается с E2F гораздо лучше I. Он конкурирует за связывание с E2F также, как гомологичный конкурент E2. Олигонуклеотиды, содержащие две нуклеотидные замены, не конкурируют с E2 ( Hiebert W.S., Lipp M. and Nevins J.R., 1989 ).
Опыты по защите от митилирования промоторной области c- myc E2F фактором, очищенным на колонке с соответствующим двухспиральным олигонуклеотидом, также показали высокую степень связывания с участком II.
В то же время из некоторых работ ( Nishikura H., 1986 , Lipp M. et al., 1987 ) следует, что связывание E2F со II участком может действовать не транскрипцию c-myc независимо от E1A контроля. Показано, что уровень E2F фактора возрастает при стимуляции сывороткой покоящихся клеток NIH3T3 , причем кинетика возрастания сходна с кинетикой активации c-myc. Эти данные свидетельствуют о том, что E2F вовлечен в нормальный контроль транскрипции c-myc.
