C-myc: факторы, взаимодействующие с негативным элементом -101-293
Hay et al. (1987 ) исследовали присоединение белковых факторов к фрагменту ДНК (252 н.п.), который включает негативный регуляторный элемент гена c-myc ( Рис. 3 ). Ядерные экстракты из клеток HeLa содержат один или несколько факторов, которые блокируют гидролиз этого фрагмента экзонуклеазой фага l около остатка -350. Блокирование гидролиза полностью зависит от присутствия клеточных белков. В экспериментах по конкуренции была определена специфичность связывания фактора в данном сайте. Сравнили способность двух фрагментов ДНК конкурировать за этот белок: 1. фрагмент 57 н.п., якобы содержащий сайт связывания ("a") и 2. прилегающий участок, ранее не дававший ясного связывания ("b").
(-350) (-293) (-101)
PruII .ScaI SmaI
-__________?_____________________
a b
a - включает негативный регулятор гена c-myc
b - включает позитивный элемент, необходимый для
действия P1
Фрагмент "a" давал полную конкуренцию с негативным элементом, в то время как "b" не давал никакой конкуренции.
Участок -101/-293 включает элемент, необходимый для активации Р1 и слабой стимуляции Р2. В этой области существует пять последовательностей, способных к связыванию, расположенных между остатками -101/-153. Первая из них - CCCTCCCC, остальные четыре берут начало из мотива C/TCC/TTCCCCA:
CTCTCCCCA
-151 -143
CCTTCCCCA
-142 -134
CCCTCCCCA
-133 -125
CCCTCCCCA
-124 -116
TAAGCGCCCCTCCCG
-115 -101
Результаты подтверждают вероятность того, что ядерные экстракты содержат один или несколько факторов, специфически связывающихся с этими последовательностями. Существует пять сайтов связывания, разделенных примерно десятью нуклеотидами. Мотивы, подобные описанным здесь, обнаружили в аналогичном месте в мышином гене c-myc и других генах. Авторы заключают, что домен -101/-293, расположенный левее человеческого гена c-myc , связывает один или несколько белков, что может иметь значение для начала экспрессии с Р1. ( Taniguchi T., 1987 ).
