Клетки, образующих области булыжника, КООБ (CAFC)
Для определения более зрелых полипотентных предшественников также используется длительная культура костного мозга, однако конечным этапом метода служит регистрация не наличия КОЕс в культуре, а присутствия полей кроветворных клеток, расположенных обычно внутри, под или над слоем прилипающих клеток кроветворной стромы; кроветворные клетки, главным образом гранулоциты разной степени зрелости, тесно прилегают друг к другу, образуя своеобразные монослойные структуры. Под микроскопом они напоминают булыжную мостовую, почему эти категории предшественников получили название клеток, образующих области булыжника, КООБ (Cob-ble-stone Area Forming Cell, CAFC ) [ Дерюгина Е.И., и др., 1991 , Breems D.A., ea, 1994 ].
Предполагается, что наиболее ранние из этих предшественников требуют для образования областей булыжника наибольшего времени, 5-8 недель ( КООБ5 ). Они очень близки к предыдущему предшественнику, однако пролиферативная активность их выше (5-фторурацил за 24 часа инкубации убивает до 40% КООБ5, не поражая КИДК).
Содержание КООБ5 в кроветворных тканях примерно на порядок выше числа пСКК, что подтверждает их расположение ниже в иерархии предшественников.
Следующая полипотентная клетка, которая выявляется этим методом, - КООБ2 . Эта клетка образует булыжник в культуре за 10-12 дней. Пролиферация ее более активна, чем у предыдущих предшественников и 24-часовая инкубация с 5-фторурацилом убивает 80-90% КООБ2 ( Breems D.A., ea, 1994 ).
По маркерам, распределению в организме, пролиферативной активности КООБ2 очень близка или даже идентична клетке, образующей колонии в селезенке через 12-14 дней после трансплантации облученным мышам, КОЕ-с12 (Colony Forming Cell, CFU-S12 ). Еще более зрелый предшественник - КОЕ-с8 (клетка, способная образовать колонию в селезенке уже через 7-8 дней после трансплантации). Клетки этого отдела представляются возможными исходными элементами для хронического миелолейкоза . В пользу происхождения хронического миелолейкоза из отдела стволовых клеток приводится факт обнаружения лимфоцитарных маркеров в бластных клетках терминальной стадии, которая является результатом появления новых субклонов опухоли (уродливые бласты) - мутаций и отбора наиболее автономных субклонов, в которых экспрессированы гены лимфоцитарного ряда, хотя нельзя исключить и более поздней мишени (более позднего уровня дифференцировки) для этой лейкозной клетки.
