Терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза (ТДТ): катализируемые реакции
В отличие от всех известных на сегодняшний день ДНК-полимераз, ТДТ катализирует синтез полинуклеотидных цепей в отсутствие матрицы. Реакция, катализируемая ТДТ, может быть описана следующим уравнением [ Kato ea 1967 ] :
d(pN)m + n dNTP <=> d(pN)m(pN)n + п РРi
Mg2+
где d(pN)m - олигонуклеотидный праймер,
Me2+ - катион двухвалентного металла,
РРi - неорганический пирофосфат.
До середины 90-х гг реакция полимеризации нуклеотидов, катализируемая ТДТ, считалась необратимой: согласно Bollum [ Bollum ea 1974 ], константа равновесия реакции при рН 7 составляет Кaрр больше или равна 99. По данным [ Srivastava ea 1980 ], ТДТ не способна катализировать пирофосфоролиз.
Однако было показано, что фермент катализирует реакцию пирофосфоролиза, причем остатки dAMP и dTMP подвергаются пирофосфоролизу из полинуклеотидной цепи значительно эффективнее, чем остатки dGMP и dCMP [ Anderson ea 1993 ].
ТДТ способна катализировать реакцию между dNTP или rNTP и различными спиртами [ Рыбалкин ea 1991 ]. Продукт этой реакции содержит один остаток dNMP и один остаток спирта. В частности, из глицерина и dATP образуется 2, 3- дигидроксипропиловый эфир 2'-дезоксиаденозин-5'-монофосфата (XXV). Реакционная способность изученных спиртов убывает в следующем ряду: глицерин = этиленгликоль > метанол > этанол.
