РНК-интерференция: процессинг двухцепочечной РНК
На первой стадии РНК-интерференции происходит процессинг двухцепочечной РНК. Расщепление двухцепочечной РНК с образованием коротких продуктов длиной в 21-23 нуклеотида было продемонстрировано как на бесклеточной системе эмбриональных экстрактов дрозофилы ( Zamore et al. 2000 , Elbashir et al. 2001 ), так и in vivo в результате иньекций радиоактивно меченной двухцепочечной РНК в эмбрионы дрозофилы ( Yang et al. 2000 ).
Скорость расщепления двухцепочечной РНК коррелирует со скоростью подавления экспрессии гомологичного гена ( Yang et al. 2000 , Elbashir et al. 2001 ). При этом комплекс, осуществляющий разрезание двухцепочечной РНК (как in vivo так и in vitro), не требует присутствия гомологичной мРНК, то есть процессиг двухцепочечной РНК происходит независимо от наличия мишени ( Zamore et al. 2000 ; Yang et al. 2000 ).
Добавление в среду негомологичной двухцепочечной РНК снижает активность РНК-интерференции как in vitro ( Tuschl et al 1999 ), так и in vivo ( Yang et al. 2000 ), что говорит о зависимости процессинга двухцепочечной РНК с образованием siRNA от фактора, количество которого ограничено. Этот фактор осуществляет процессинг независимо от нуклеотидной последовательности и длины двухцепочечной РНК ( Zamore et al. 2000 ; Yang et al. 2000 ; Bernstein et al. 2001 , Elbashir et al. 2001 ), однако, по-видимому, он не может узнавать и процессировать двухцепочечную РНК короче 30-38 пар нуклеотидов ( Elbashir et al., 2001b ).
