siRNA: участие rde-1, rde-4, mut-7 в образовании и стабилизации
Биохимические исследования продемонстрировали, что in vitro единственным белковым продуктом, необходимым для процессинга двухцепочечной РНК на siRNA является DICER . Анализ влияния мутаций в генах первой группы rde-1 и rde-4 на образование siRNA из инъецированной в C. elegans двухцепочечной РНК показал, что мутация в rde-4 действительно приводит к нарушению процессинга двухцепочечной РНК на siRNA, в то время как мутация в rde-1 не влияет на количество образованных из двухцепочечной РНК siRNA ( Parrish and Fire, 2001 ).
В соответствии с этим инъекция искусственно синтезированных siRNA приводит к эффекту РНК-интерференции у животных, мутантных по rde-4, но не rde-1 ( Parrish and Fire, 2001 ).
Таким образом можно предположить, что RDE-4 действительно участвует на стадии процессинга двухцепочечной РНК на siRNA, и видимо, совместно с белком DICER, в то время как RDE-1 необходим для последующих стадий.
Установлена также неоднозначность влияния продуктов генов rde-1 и mut-7 на образование siRNA ( Tijsterman et al., 2002 ). При инъекциях двухцепочечной РНК в животных, мутантных по любому из этих генов, а также по rde-4, siRNA не детектируются (при этом результат по гену rde-1 формально противоречит выводу, полученному в работе Parrish с соавт). Однако экстракты, полученные из мутантов по генам rde-1 и mut-7, способны к нормальному процессингу двухцепочечной РНК на siRNA. Такой результат свидетельствует о том, что продукты этих генов, не являясь необходимыми непосредственно для процессинга двухцепочечной РНК на siRNA, участвуют в дальнейшей стабилизации siRNA in vivo.
Следует отметить, что существование белков, стабилизирующих siRNA, предполагалось и при изучении PTGS у растений ( Mette et al., 2001 ). Характерно, что в стабилизации siRNA принимает участие и ген mut-7, относящийся ко II группе генов в РНК-интерференции.
