ВИЧ: диагностика методом ПЦР: особенности
Метод ПЦР позволяет выявлять в биологических объектах даже единичные вирусные частицы или бактерии. Чувствительность амплификационных тест- систем составляет от 1 до 100 вирусов, тогда как чувствительность иммунологических тестов на 2-4 порядка ниже.
ПЦР имеет высокую специфичность, которая обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного вида возбудителя, фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров и жесткими условиями их присоединения к матрице при проведении реакции. Соответственно, амплификационные тест-системы, в отличие от иммунологических тест- систем, позволяют избежать проблем, связанных с перекрестно реагирующими антигенами. И, наконец, привлекательна быстрота получения результата при использовании ПЦР. За счет автоматизации определение возбудителя осуществляется, обычно, в течение одного рабочего дня.
Очень высокая чувствительность метода имеет и обратную сторону медали: реакция может происходить при наличии примесей, случайно попавших в рабочие растворы, на инструменты и посуду. Даже наличие одной молекулы вируса, случайно внесенной в реакцию извне (даже из воздуха), может дать положительный сигнал, хотя на самом деле в анализируемой крови вирус отсутствует. ПЦР - метод, позволяющий оценивать наличие в крови как самого вируса, так и провируса (РНК или ДНК).
В 1994 г. фирма Ля Рош выпустила первую коммерческую тест-систему под названием AMPLICOR HIV-1 Monitor, с помощью которой можно точно и надежно измерить количество РНК ВИЧ-1 (вирусную нагрузку) в крови. Эта система и сегодня является единственной, разрешенной Управлением по контролю качества продуктов и лекарств США (FDA) для измерения вирусной нагрузки. Тест позволяет выявить наличие всего 50 копий вирусной РНК в 1 мл крови, что значительно чувствительней, чем у других диагностических тест-систем.
Диагностическая чувствительность оценивается в процентах и определяет долю пациентов с данным заболеванием, дающих истинно положительные результаты при использовании конкретного набора. Например, для французских наборов "Ампликор" диагностическая чувствительность составляет от 95 до 100%. Российские фирмы-производители выпускают диагностикумы, сходные по этому показателю. На сегодняшний день ПЦР- наборы для диагностики ВИЧ-инфекции не достигают диагностической чувствительности более 98%, то есть выявляют ВИЧ у 98 из 100 ВИЧ- инфицированных людей, в то время как современные тест-системы, основанные на ИФА, имеют чувствительность, равную 99%. Каждая доля процента - это тысячи людей, у которых или вовремя не обнаружили ВИЧ и это помешало начать экстренную медицинскую помощь, или наоборот, смертельно напуганных без причины.
Основная причина меньшей диагностической чувствительности ПЦР при высокой чувствительности самого метода - сильная вариабельность генома ВИЧ, на который она направлена.
