Сплайсинг: роль мяРНК
Изменения сплайсинга, вызванные мутациями, приводящими к появлению или разрушению канонических последовательностей, указывают на то, что эти последовательности существенны для узнавания границ интрон-экзон. Как же узнаются такие последовательности? Можно предположить две схемы этого процесса. Либо фермент узнает специфически пару канонических последовательностей, либо они могут спариваться с основаниями РНК, что приведет к образованию вторичной структуры РНК, которая и будет узнаваться ферментом. При этом конформация РНК играет такую же роль, как и в случае других ферментативных реакций при процессинге РНК (хотя здесь на спаривание оснований оказывают влияние и белки).
В качестве такой РНК выступают мяРНК . 5' концевая последовательность одного из видов такой РНК комплементарна последовательностям, находящимся на границах экзон-интрон, благодаря чему происходит спаривание оснований мяРНК и пре-РНК.
Доказательство участия мяРНК в сплайсинге. Было показано, что U1 мяРНК спаривается с выделенной in vivo гяРНП ( Calvet J.P., 1981 ) и может избирательно связываться с 5' сайтом сплайсинга in vitro ( Mоunt S.M., 1983 ). Кроме того эксперименты по иммунопреципитации демонстрируют, что в сырых экстрактах ядер U1 мяРНП избирательно взаимодействует с 5' сайтом сплайсинга ( Black D.L., 1985 ). Также U1 мяРНП детерминанты связаны с комплексом сплайсинга, выделенным из сахарозного геля, который содержит пре- мРНК и промежуточные продукты сплайсинга ( Bindereif A., 1986 , Grabowski P.J.,1985 ). Еще одним свидетельством является то, что добавление антител к мяРНК может ингибировать сплайсинг, а не полностью нарушать экспрессию генов, т.к. остальные ее стадии протекают как обычно ( DiMaria P.R., 1985 , Kramer A., 1984 ).
Дополнительно к U1 РНК несколько предложений существует относительно участия других мяРНП в реакции сплайсинга, в частности U2 мя РНП ( Fradin A., 1984, Keller E.B.,1984 ). Существенная роль U2 мяРНК была продемонстрирована, когда показали, что экстракты с разрушенной с помощью РНказного Н- направленного лизиса структурой U2 мяРНП не могут поддерживать сплайсинг.
