Иммортализация: роль гена прохибитина
Одним из генов, возможно, участвующих в иммортализации, является ген прохибитина . который был вначале идентифицирован по способности прохибитина подавлять синтез ДНК в диплоидных фибробластах человека [ McClung, ea 1989 , Nuell, ea 1991 ]. Уровень мРНК прохибитина ниже в стареющих фибробластах, чем в молодых [ McClung ea 1992 ]. Белок прохибитин существует в нескольких формах, что, вероятно, связано с его посттрансляционной модификацией. Одна из этих форм составляет 10% всего прохибитина и отсутствует в стареющих клетках [ Liu, ea 1994 ]. Иммортализованные клетки, вероятно, имеют повышенную копийность гена прохибитина и соответственно повышенный уровень одной из изоформ его мРНК и белка [ Jupe, ea 1995 , Jupe, ea 1996 ]. Эти данные кажутся несколько парадоксальными, поскольку прохибитин считают суппрессором роста . Изоформа этого белка, отсутствующая в стареющих клетках, может быть неактивной формой прохибитина, так что стареющие клетки содержат конститутивно активный прохибитин [ Liu, ea 1994 ]. После инъекции в иммортализированные линии клеток мРНК прохибитина подавляет синтез ДНК только в линиях клеток, отнесенных к группе комплементации В [ Jupe, ea 1995 , Jupe, ea 1996 ], что свидетельствует о том, что этот ген специфически включен в один из механизмов иммортализации клеток человека. Показано существование двух аллелей прохибитина, один из которых имеет дополнительный сайт расщепления EcoR1. Исследованные нормальные клетки были гетерозиготны по этим двум аллелям, но клетки, отнесенные к группе комплементации В, были гомозиготны по аллелю, содержащему дополнительный сайт расщепления EcoR1 [ Jupe, ea 1995 , Jupe, ea 1996 ]. Кроме того, последовательность 3'-нетранслируемого фрагмента изоформы мРНК, суперэкспрессированной в иммортализованных клетках, принадлежит к дикому типу во всех клетках, кроме клеток из группы комплементации В. Показано, что эта 3'-нетранслируемая область отвечает за активность мРНК прохибитина, подавляющую рост [ Jupe, ea 1996 ]. Эти данные показывают, что мутация и потеря гетерозиготности по гену прохибитина участвуют в иммортализации линий клеток, от несенных к группе В, и что клетки, отнесенные к другим группам комплементации, нечувствительны к негативному эффекту мРНК прохибитина. Однако ген прохибитина вряд ли является первичным геном ТОП для группы комплементации В, поскольку эксперименты с переносом хромосом в микроклетках показали, что хромосома 4 связана с группой комплементации В [ Ning, ea 1991 ]. Прохибитин расположен в хромосоме 17 и наиболее вероятно, что он участвует в составе группы комплементации В, но на более позднем этапе процесса иммортализации [ Dell'Orco ea 1996 ].
