Вектора ретровирусные: классификация по способу зкспрессии гена
Поскольку ретровирусологов очень много, то и наизобретали очень много разных векторов. Тем не менее все векторы можно сгруппировать по способу экспрессии чужеродных генов, которые в них вставляют генные инженеры. Посмотрим на Рис. 4 .
В первой группе используется та самая стратегия, которую мы с вами видели у вируса дикого типа. Один только 5'-LTR используется для запуска транскрипции, а разные гены транслируются за счет сплайсинга РНК. К этой группе относятся векторы типа a и b на рисунке. Они могут содержать один чужеродный ген (a) или два (b). В последнем случае второй ген может транслироваться после сплайсинга. Поскольку в клетке присутствует как сплайсированная, так и исходная, несплайсированная РНК , оба гена транслируются.
Во второй группе векторов каждый ген, который хотят экспрессировать, имеет свой собственный промотор. Он имеет автономию. Пример такого вектора показан на рис. 4, с. Здесь ген А подчиняется вирусному промотору, а ген В - своему собственому, пристроенному к нему искусственно.
Третья группа использует полицистронную систему без сплайсинга. Эта ситуация показана на Рис. 4, д. Гены следуют один за одним , а чтобы обеспечить их трансляцию между ними вставляют сигнал реинициации из 5'-нетранслируемой области полиовируса, РО, который дает возможность рибосоме прикрепиться внутри матрицы и инициировать синтез белка. Возможны и другие варианты полицистронных структур. Но если вас это интересует, прочтите о них в обзоре [ Roemer ea 1992 ]. В качестве одного из генов в ретровирусный вектор вводят ген, обеспечивающий селекцию тех клеток, которые позволили ретровирусному вектору встроиться в свой геном. Это может быть, например, ген, обеспечивающий таким клеткам устойчивость к антибиотику неомицину.
