Вектора ретровирусные: проблемы с экспрессией в зародышевых клетках
Свои проблемы с экспрессией возникают при использовании ретровирусных векторов. Я хочу познакомить Вас с ними, хотя многим покажется, что это излишняя детализация. А тем не менее эта информация покажет некий интересный аспект, возможно важный для эволюции, возможно, говорящий или намекающий, что задумывалась Природа, как уберегать святая святых - зародышевые клетки от нежелательных вирусных инфекций. Оказывается, что предимплантационный мышиный эмбрион не позволяет ретровирусам экспрессирооваться и реплицироваться. Не разрешают ему этого и клетки эмбриональной карциномы. Ретровирус может преуспеть в своем жизнеобеспечении только на поздних стадиях развития эмбриона. Неудачи вируса связывают с тем, что его регуляторные элементы, сосредоточенные, как вы знаете, в длинных концевых повторах ( LTR ), инактивируются эмбриональными клетками. Эта инактивация может быть связана с метилированием провируса (т.е. вируса, встроенного в хозяйский геном), может зависеть от присутствия специальных репрессоров или, наоборот, от отсутствия клеточных активаторов, необходимых для вирусного существования . Но как бы там ни было, факт есть факт. Не реплицируется ретровирус в ранних эмбриональных клетках, и если он попал в них, то не реплицируется и потом. Клетки дифференцируются, хозяйские гены включаются и выключаются в процессе развития, а вирус молчит. Хотя бывают и исключения, но в большинстве случаев это так. Конечно, для тех, кто хочет все-таки использовать ретровирусы в качестве векторов для переноса генов в животные, эта особенность неприятна. И они придумывают, как ее обходить. Ретровирус используют для переноса нужной ДНК в геном хозяина. Для этого эту ДНК вставляют в геном ретровируса. Но для ее экспрессии к ней присоединяют какой нибудь другой, не ретровирусный, регуляторный элемент. Мы говорили о neo гене. Его можно вставить в ретровирус, присоединить промотор гена тимидинкииназы вируса простого герпеса (эта только одна из возможностей, вы понимаете, что можно использовать и другие промоторы), внедрить такой ретровирус в эмбрион и далее клетки, содержащие в геноме ретровирусные последовательности, окажутся устойчивыми к антибиотику G418, о котором вы прочли раньше. Вот вам и селекция.
