Трансгеноз: схема создания трансгенных животных
На рис. 1 приведена схема, которую использовали в большинстве опытов по созданию трансгенных животных и продолжают использовать и сейчас [ Micklisch ea 1991 ]. Здесь речь идет о внедрении гена множественной лекарственной устойчивости MDR1 , но на его месте мог бы оказаться любой другой ген.
Путем скрещивания мышей различных линий получают оплодотворенные зиготы.
Перед слиянием мужского и женского пронуклеусов в зиготу в мужской пронуклеус (он больше) путем микроинъекции вводят ДНК, которую хотят внедрить в геном.Обработанные таким образом зиготы инкубируют в СО2 инкубаторе.
Зиготы подсаживают в матку ложнобеременной (Да! их получают скрещиванием с вазэктомированными самцами) самке мыши. Она приносит потомство, которое может оказаться трансгенным, если микроинъецированная ДНК встроилась в геном путем рекомбинации. (Всегда необходимо доказать трансгенность, для этого существуют разные пути, см. Трансгеноз: трудности идентификации трансгенности )
Трансгенных потомков (они гетерозиготны по введенному гену) скрещивают с гомозиготными мышами и получают генерацию F1, среди которой, как и положено, половина гетерозигот.
Скрещивают между собой гетерозигот поколения F1 и получают гомозиготных по введенному гену мышей.
Если есть желание, чтобы ген не только встроился, но еще и экспрессировался , его нужно снабдить подходящими регуляторными элементами - промоторами, энхансерами и т.п., но об этом позже. Сейчас важно, что мы ввели требуемую генетическую информацию в геном животного, и она наследуется. Парасексология восторжествовала. ДНК в геном животного можно вводить и другими способами.
