Трансгеноз: хромосомные перестройки, и модификация генов: методика
1. Создадим трансгенную мышь, содержащую и экспрессирующую ген cre. Создадим условия для его тканеспецифической экспрессии.
2. Создадим другую трансгенную мышь, в которой некий участок генома ограничен с двух сторон прямыми повторами loxP последовательности.
3. Скрестим эти две линии трансгенных мышей. Ясно, что получится? У двойных трансгенных мышей участок генома, ограниченный lox сайтами будет выкидываться. Выкидываться только в тех соматических клетках, которые экспрессируют cre ген. Все это вы увидите на рис. 13А .
Можно не только делетировать, но и инвертировать фрагменты генома, расположенные между двумя сайтами гомологичной рекомбинации. Для этого нужно эти сайты расположить навстречу друг другу. Это вы увидите на Рис. 13В .
Сейчас уже есть несколько примеров успешного применения этой системы. При этом используют самые различные варианты. Экспрессия сre может быть не только ткане-специфичной, но и индуцибельной, и тогда запланированные делеции происходят только после индукции экспрессии cre. В этой связи не могу удержаться от рассказа об одной из недавних работ немецкого иммунолога Клауса Раевского [ Kuhn ea 1995 ]. В работе использовали индуцибельный промотор гена Mx1 мыши . Этот ген является участником защитной системы против вирусных инфекций и не работает в здоровом организме. Но его промотор активируется под действием интерферонов . Были созданы трансгенные мыши, содержащие промотор гена Mx1 , соединенный с геном cre , и трансгенные мыши, содержащие ген ДНК-полимеразы b между двумя прямыми повторами lox. Скрестили эти две линии и получили дважды трансгенных мышей. При инъекциях интерферона наблюдали активные делеции гена полимеразы в печени и менее активные в других тканях.
Я думаю, что эта техника имеет очень большие перспективы, и скоро мы увидим фейерверк работ в различных и фундаментальных, и прикладных областях молекулярной генетики с ее использованием.
