Методы диагностики, основанные на идентификации РНК
Наиболее распространенными методами, основанными на идентификации РНК, являются РТ-ПЦР , гибридизация in situ , анализ рибонуклеазной защиты и Нозерн блот-гибридизация . Изменение количества клеточных мРНК является главной характеристикой экспрессии генов; исследования этих изменений облегчают понимание механизмов, с помощью которых регулируемая экспрессия генов способствует контролю за биологическими функциями.
Для подсчета количества мРНК используются разнообразные методы, в том числе Нозерн блот и щелевой блот-анализы, гибридизация in situ и количественный РТ-ПЦР.
Нозерн блот-анализ является недостаточно чувствительным для обнаружения малого количества мРНК и имеет довольно ограниченное клиническое применение из-за относительной нестабильности РНК и того, что для этого метода требуется довольно большое количество РНК и, следовательно, большое количество клеток (10 в 8-ой или 9-ой степени).
РНК-гибридизация in situ обладает преимуществом обнаружения неспецифических мРНК в конкретных клетках, но этот метод требует много времени и не позволяет точно определить количество мРНК.
В настоящее время имеются количественные методы измерения при помощи РТ-ПЦР, которые считаются особенно чувствительными для обнаружения небольших количеств мРНК. РТ-ПЦР позволяет обнаружить малое количество мРНК, начиная с субмикрограмма от общего количества мРНК. Метод предпочтительнее для обнаружения и подсчета мРНК, когда конкретный дубликат встречается редко или имеет ограниченное распространение в клетках.
Анализ рибонуклеазной защиты является чувствительным методом обнаружения и измерения незначительного количества специфических мРНК в пробе общей клеточной РНК. Анализ рибонуклеазной защиты в настоящее время считается наиболее надежным методом обнаружения и измерения количества мРНК.
