Кассетный мутагенез
Для кассетного мутагенеза из гена вырезают фрагмент и встраивают на его место "кассету" с измененной нуклеотидной последовательностью. При этом не нужна селекция, поскольку большинство копий гена оказывается мутантными, и не требуется предварительного получения однонитевой матрицы. В зависимости от способа синтеза получают олигонуклеотиды или двунитевые кассеты с целенаправленными или случайными изменениями. Синтез кассет (до 600 п.н.) проводят с помощью полимеразной цепной реакции. При этом праймеры комплементарны подвергаемому мутагенезу участку, содержат измененную последовательность или 5'-конец, некомплементарный матрице ( Higuchi et al., 1988 ; Landt et al., 1990 ). В условиях, снижающих точность полимеразной цепной реакции возможно получение кассет со случайными заменами.
