Методики обогащения культуры ауксотрофами
I. Селекция при помощи антибиотиков. Основана на том, что антибиотик убивает делящиеся клетки, например, в минимальной среде не делятся ауксотрофы, в отличие от прототрофов, и потому выживают. Использовали антибиотики нистатин, амфотерицин В, эндомицин. В экспериментах по реконструкции было достигнуто тысячекратное обогащение ( Snow, 1966 ; Moat et al., 1959 ).
II. Голодание. Некоторые ауксотрофы, нуждающиеся в инозите (ino), жирных кислотах (fas), в минимальной среде претерпевают несбалансированные деления и погибают. При возникновении дополнительной мутации ауксотрофности деление приостанавливается из-за нехватки в среде соответствующего метаболита, и ауксотроф выживает. Было достигнуто 75-100-кратное обогащение ( Henry et al., 1975 ).
III. Радиационное самоубийство. При выращивании на среде, содержащей метаболиты, меченные радиоактивным тритием, делящиеся клетки погибают. Ауксотрофы, не растущие на минимальной среде, тритий не включают, и, соответственно, выживают ( Littlewood, Davies, 1973 ).
Появились сообщения об обогащении культуры адениновыми мутантами и мутантами rho- при помощи проточной цитофлюорометрии ( Skowronek et al., 1990 ).
Методы обогащения, впрочем, имеют ограниченное применение, поскольку в реальных экспериментах достигается значительно меньшее обогащение, нежели в опытах по реконструкции. Кроме того, метод голодания предполагает введение в генотип используемых штаммов мутаций ino или fas, что не всегда приемлемо.
