Выделение рибосомных фракций
Клетки ресуспендировали в буфере с 25 мМ tris-HCl pH 8.0, 60 мМ KCl, 10 мМ MgCl2, 20% сахарозы и разрушали, подвергая пяти циклам замораживания в жидком азоте с последующим оттаиванием при 37*С. Полученную суспензию разводили в четыре раза в том же буфере с добавлением детергента 0.5% Brij58, 10 ед./мл ДНказы I, 0.15% деоксихолиевой кислоты и 3 мМ MgSO4. Суспензию инкубировали на льду 30 мин и удаляли клеточные обломки посредством центрифугирования в течение 30 мин при 30000 g. Лизат наносили на 10-40% сахарозный градиент (в 25 мМ tris-HCl pH 7.8, 50 мМ KCl, 10 мМ MgCl2, 3 мМ DTT) и центрифугировали в течение 16 ч при 18 000 об/мин (ротор SW38Ti). После центрифугирования дно пробирки прокалывали и собирали фракции.
