Исследование оперона микроцина C: электрофорез ДНК в агарозном геле
Аналитический электрофорез в агарозном геле: продукт ПЦР амплификации, препарат плазмидной ДНК или продукт рестрикции (2-5 мкл) смешивали с 1 мкл буфера для нанесения (бромфеноловый синий 0.25%, ксиленцианол 0.25%, глицерин 30%) и наносили на гель для электрофореза. Электрофорез проводили в 1% агарозе с добавлением бромистого этидия (0.1 мкг/мл) при 100 В в буфере TAE (трис-ацетат 40 mM, EDTA 1 мМ, pH 8.3). ДНК визуализировали при помощи УФ-трансиллюминатора и фиксировали результаты с помощью системы гель-документации.
Препаративный электрофорез в агарозном геле: продукты ПЦР амплификации или рестрикции (50-100 мкл) смешивали с 5 мкл буфера для нанесения и наносили на гель. Электрофорез проводили в 1% агарозе с добавлением бромистого этидия (0,1 мкг/мл). Для выделения ДНК полосу, соответствующую нужному продукту реакции, вырезали из агарозного геля, помещали в пробирку объемом 1,5 мл и проводили выделение ДНК, используя набор реактивов GeneJET Gel Extraction Kit (Fermentas) согласно протоколу фирмы-производителя.
