Оценка продукции и чувствительности к микроцину С
Для оценки продукции микроцину С (McC) использовали наиболее чувствительные к микроцину клетки штамма E.coli BL21(DE3). 100 мкл свежей ночной культуры BL21(DE3) смешивали с 5 мл мягкого (0.7%) LB-агара и заливали в 9 см чашку Петри. После застывания поверх топ-агара наносили аликвоты по 5 мкл супернатантов тестируемых на продукцию McC клеточных культур и растворы очищенного McC известной концентрации для калибровки. Чашки инкубировали при 37*С в течение 3 ч или до появления видимого клеточного газона. Продукцию антибиотика оценивали, сравнивая диаметры зон ингибирования роста, полученных при нанесении супернатантов исследуемых клеточных культур и при нанесении растворов McC известной концентрации (от 1 до 20 мкМ).
Для оценки чувствительности клеток к McC из культуры тестируемых клеток готовили мягкий LB-агар, как описано выше. На его поверхность наносили капли раствора McC (50-300 мкМ). Через 3-5 часов инкубации при 37*C измеряли диаметр зон ингибирования роста клеток. Устойчивыми считали клетки, дающие равномерный газон без зон ингибирования роста.
