Аппарат Гольджи: молекулярный механизм функционирования
Гептамерный цитозольный белковый комплекс, называемый COPI (мембранный комплекс Гольджи, коатомер) , в соединении с GTP-связывающим белком ARF 1 образует оболочку таким образом, что, будучи ассоциированным в мембраны Гольджи, предположительно содействует мембранному экзоцитозу и реакциям расщепления, связанным с мембранным транспортом Гольджи [см. обзор Rothman и Wieland, 1996 ]. Включение COPI в мембраны Гольджи требует присутствия ARF1, который работает по GTPазному циклу . ARF1-GTP осуществляет включение COPI в мембраны Гольджи, тогда как гидролиз GTP предположительно запускает высвобождение COPI из мембраны в цитозоль, что делает возможным включение COPI в периодические циклы сборки-разборки оболочки. Таким образом, ARF1 функционирует в качестве двойного переключателя, осуществляющего управление интеграцией COPI в мембраны и, следовательно, регулировку его функции.
Первоначально предполагалось, что связывающиеся с мембраной ARF1 и коатомер участвуют неселективно в формировании транспортных пузырьков. Данная модель предполагала наличие значительного потока транспортируемых веществ через секреторные пути и постулировала, что полимеризация коатомера, управляемая посредством циклизации ГТФ с помощью ARF1, обеспечивает механико-химическую энергию для образования пузырьков [см. обсуждение Mellman и Simons, 1992 ]. В результате проведенных с тех пор разнообразных исследований указанная точка зрения была скорректирована [ Rothman и Wieland, 1996 ]. Активация ARF1 оказывает значительное влияние на фосфолипидный состав мембраны и стимулирует встройку , актина и других белков цитозоля в мембраны Гольджи [ De Matteis, Morrow, 1998 ]. Это предполагает способность ARF1 облегчать процессы сортировки, эндоцитоза и стыковки мембран комплекса Гольджи.
Для фрагмента коатомера была также обнаружена способность связывать два остатка лизина в С-концевом мотиве трансмембранных белков , обеспечивающих циклический транспорт между Гольджи и ЭР и функционирующих, как предполагают, в качестве возвращающих в ЭР последовательностей [см. обзор Gaynor ea, 1998 ]. Взаимодействуя подобным образом с цитоплазматическими фрагментами транспортирующих белков, COPI может собирать транспортируемые вещества в везикулы и опосредовать сортировку транспортирных белков.
Что касается последней из указанных функций, предметом значительных дискуссий был вопрос о том, упаковывает ли мембраносвязанный COPI транспортируемые вещества в везикулы экзо- или эндоцитозного или обоих типов.
У дрожжей мутантные субъединицы COPI были идентифицированы по схеме, разработанной для обнаружения мутантов, неспособных удерживать/реутилизировать маркированные двумя остатками лизина молекулы при сохранении остальной части цикла [ Gaynor ea., 1998 ].
В результате возникло предположение о том, что ассоциированный с содержащими дилизиновые мотивы трансмембранными транспортирующими белками COPI опосредует обратный транспорт. Однако, дальнейший анализ отдельных аллелей sec21 (гамма-COP) показал наличие зависящих от типа транспортируемого вещества селективных дефектов и при прямом транспорте [ Gaynor и др., 1998 ]. Более того, коатомер распознает также последовательности, родственные дилизиновым и диаргининовым, в цитоплазаматических фрагментах белков p24 , большого семейства потенциальных переносчиков, которыми изобилует Гольджи и для которых было показано участие в двунаправленном транспорте [ Nickel, Wieland, 1998 ]. С учетом этих, как и предыдущих биохимических и морфологических данных, подтверждающих роль коатомера в прямом транспорте, становится неясным направление (т. е., прямое или обратное) переноса везикул. Дополнительная возможность заключается в том, что опосредованная ARF1 ассоциация COPI с мембраной может служить для латерального разделения белков и липидов в отдельные группы, транспортируемые в дальнейшем прямым или обратным способом. Наличие данной функции было предложено в результате наблюдения того, что блокирование ассоциации COPI с мембраной у мутантов с ингибированием ARF1 либо посредством обработки брефельдином А (BFA) , предотвращающим активацию ARF1, само по себе не препятствует мембранному транспорту, но дестабилизирует его, что приводит к неселективности возврата белков в ЭР [ Lippincot-Schwartz, ea., 1998 ).
