Прайминг фагоцитов и клеточные мембраны (ПОЛ, проницаем. для кальция)
Ранее уже отмечалось, что прайминг лейкоцитов in vitro может быть вызван воздействием различных физико-химических факторов, не связанных непосредственно с жизнедеятельностью организма. Особый интерес представляет формирование прайминга лейкоцитов в результате нарушения структуры и ионной проницаемости клеточных мембран , в частности для ионов кальция. Одним из таких воздействий является перекисное окисление липидов мембран. [ Лопухин ea 1983 , Рубцов ea 1984 ]. Учитывая важную роль Са2+ в формировании прайминга лейкоцитов, представляло интерес выяснить характер влияния перекисной модификации мембранных липидов на изменение функционального потенциала фагоцитов.
В первой серии экспериментов в качестве модифицирующего фактора использовали продукты ПОЛ , которые образовывались при УФ-облучении суспензии липосом [ Владимиров ea 1988 , Kovalchuk ea 1991 ].
Выделенные ПМЛ крови здоровых людей помещали в 5 мл супернатанта и инкубировали 20 мин при 37 С. После этого ПМЛ осаждали центрифугированием при 1500g 10 мин. Отмытые от продуктов липидной пероксидации ПМЛ ресуспендировали в растворе Хенкса и измеряли ЛХЛ при стимуляции фагоцитов ОЗ и экспрессию поверхностных Fc-рецепторов, определяемую по связыванию ФИТЦ-ИК [ Kovalchuk L.V., ea 1991 ].
Было обнаружено, что по мере увеличения дозы УФ-облучения суспензии липосом количество ТБК-активных продуктов в супернатанте после центрифугирования липосом возрастало практически пропорционально. С другой стороны, величина ЛХЛ-ответа ПМЛ на последующую после инкубации нейтрофилов в супернатанте стимуляцию по мере УФ-облучения липосом увеличивалась, достигая максимума, а затем наступала стадия угнетения. Это означает, что выраженность прайминга ПМЛ зависела не от общего содержания, а, по-видимому, от качественного состава продуктов ПОЛ в супернатанте. Наиболее важными компонентами в смеси образующихся продуктов могут быть гидроперекиси липидов, способные при встраивании в мембраны увеличивать их ионную проницаемость, в том числе и для ионов кальция [ Владимиров ea 1988 , Рубцов ea 1984 ], что является необходимым этапом в процессе праймннга лейкоцитов. С помощью методики Асакавы [ Asakawa ea 1979 ], позволяющей по приросту ТБК-активных продуктов при введении в среду ионов железа (ДМДА) определить относительное изменение содержания гидроперекисей, было показано, что изменение количества гидроперекисей в супернатанте при увеличении дозы УФ-облучения липосом по характеру совпадает с кривой зависимости величины ЛХЛ-ответа ПМЛ. Все это позволяет предположить, что модификация мембран лейкоцитов в результате воздействия гидроперекисей липосомальных липидов, приводящая к увеличению содержания Са2+ в цитозоле клеток, и является наиболее вероятной причиной прайминга ПМЛ.
