Антигены HLA: серологические методы определения
Основной серологический метод типирования антигенов HLA - лимфоцитотоксический тест. Метод заключается в следующем:
- К сывороткам против разных антигенов HLA добавляют по 2000 исследуемых лимфоцитов.
- После инкубации добавляют комплемент (его источником может служить кроличья сыворотка).
- Лимфоциты, несущие антиген, против которого направлена сыворотка, под действием комплемента разрушаются.
- Затем к лимфоцитам добавляют краситель, который окрашивает только живые клетки.
Результат оценивают по относительному числу погибших лимфоцитов. В таблице 17.2 представлена шкала оценки лимфоцитотоксического теста, а в табл. 17.3 - пример серологического типирования антигенов HLA. Резко положительный результат свидетельствует о том, что лимфоциты несут исследуемый антиген.
Недостатки серологических методов типирования антигенов HLA. Для типирования антигенов класса I необходимо не менее 15 мл, а для типирования антигенов класса II - не менее 30 мл крови. Жизнеспособность выделенных лимфоцитов должна составлять не менее 80%. Загрязнение, длительное и неправильное хранение приводят к снижению качества сывороток и комплемента, используемых для исследования. Получение диагностических сывороток - трудоемкий и дорогостоящий процесс. Он сводится к исследованию большого количества проб сывороток от многорожавших женщин с помощью панелей лимфоцитов, типированных по антигенам HLA. Особенно трудно получить сыворотки к редким антигенам HLA. При оценке результата серологического типирования антигенов HLA необходимо учитывать, какая лаборатория его проводила и каково качество используемых сывороток. Наименее доступны сыворотки к антигенам HLA класса II, особенно к антигенам HLA-DP.
