Ангиогенин: стимуляция протеолитической и фибринолитической активности
В нормальных условиях эндотелиальные клетки окружены базальной мембраной - плотной непроницаемой сетью, состоящей из коллагена типа IV , ламинина , фибронектина , энтактина и гепарансульфатпротеогликанов . Из-за отсутствия в ней пор, пассивная миграция клеток невозможна. При ангиогенезе эндотелиальные клетки приобретают, благодаря активации клеточных протеаз , инвазивный фенотип и способность пронизывать базальную мембрану и интерстициальный матрикс . Особое место в этом процессе занимает система плазмин / активатор плазминогена . АНГ стимулирует клеточноассоциированную протеолитическую активность трансформированных эндотелиальных клеток аорты быка GM 7373 . Уровень этой стимуляции определяется дозой АНГ. При использовании для определения протеазной активности в качестве субстрата хромозима tPA (пептида, специфичного для tPA), а в качестве стандарта - двухцепочечного tPA человека, нормальная протеолитическая активность составляет 0.75 мЕ/мкг белка. Стимуляция обнаруживается при концентрации АНГ 1 нг/мл. В присутствии 10 нг/мл АНГ клеточноассоциированная протеолитическая активность повышается в 9 раз. Максимальная стимуляция (10.5-12.5 мЕ/мкг белка) достигается при концентрации АНГ 0.5 мкг/мл и наблюдается вплоть до концентрации 50 мкг/мл [ Hu G.-F. et al., 1994 ].
Фибрин - естественный субстрат плазмина. Поскольку АНГ и его комплекс с актином повышают активность системы tPA/плазмин in vitro [ Hu G.-F., Riordan J.F., 1993 ], а также стимулируют клеточноассоциированную протеолитическую активность этой системы в культуре эндотелиальных клеток [ Hu G.-F. et al., 1994 ], закономерно допустить, что АНГ обладает стимулирующим эффектом и на фибринолитическую активность эндотелиальных клеток. Действительно, экзогенный АНГ в концентрации 1 мкг/мл в 2 раза стимулирует фибринолитическую активность клеток GM 7373: трехмерный фибриновый гель полностью растворяется клетками в присутствии АНГ на 5-й день, без него - на 10-й. С помощью флуоресцирующего фибринового геля, приготовленного из меченого ФИТЦ фибриногена и тромбина показано, что стимуляция фибринолитической активности клеток GM 7373 обнаруживается уже в присутствии 50 нг/мл АНГ (в 1.7 раза), максимальная стимуляция (примерно в 3 раза) регистрируется при концентрациях 0.4-6.4 мкг/мл [ Hu G.-F. et al., 1994 ]. В отличие от протеолитической, фибринолитическая активность ослабевает при концентрациях АНГ свыше 10 мкг/мл [ Hu G.-F. et al., 1994 ].
Ангиогенез при патологических состояниях (клеточноопосредованный иммунитет, опухолевый рост, заживление ран) сопровождается избыточным отложением фибрина. Возможно, что одной из важнейших физиологических функций АНГ является стимуляция фибринолиза, опосредованного эндотелиальными клетками. Оказалось, что связывание АНГ с актином клеточной поверхности и последующее открепление образовавшегося комплекса с поверхности эндотелиальных клеток играет решающую роль и в индуцируемой ангиогенином инвазии эндотелиальных клеток .
