Ангиогенин: влияние на пролиферацию эндотелиальных клеток
Истинный ангиогенез и образование обширной сосудистой сети - это не только миграция и перераспределение существующих эндотелиальных клеток, но и их пролиферация. Поэтому для полной характеристики АНГ как ангиогенного фактора было бы желательным обнаружить у него способность повышать митогенную активность в эндотелиальных клетках. С целью найти специфические условия, в которых АНГ способен стимулировать рост эндотелиальных клеток человека, было проведено исследование включения # ^Н3 Tимидина и клеточной пролиферации при разных режимах культивирования [ Hu G.-F. et al., 1997 ].
Оказалось, что АНГ стимулирует синтез ДНК и пролиферацию эндотелиальных клеток только в культурах с очень низкой плотностью клеток (менее # 104 клеток на см2). Оптимальные значения клеточной плотности для включения рЩтимидина и клеточной пролиферации # -6 х Ю3-!^ х 104 и 4-8 х 103 клеток на см2 соответственно. АНГ не стимулирует включение тимидина и пролиферацию в конфлюэнтных культурах эндотелиальных клеток [ Hu G.-F. et al., 1997 ]. Способность АНГ стимулировать рост эндотелиальных клеток определяется его концентрацией [ Hu G.-F. et al., 1997 ] ( рис. 10 ). Стимуляция включения тимидина и пролиферация клеток АНГ в различных условиях культивирования никогда не превышает 80%.
Таким образом, АНГ является реальным, хотя и слабым митогеном для эндотелиальных клеток человека [ Hu G.-F. et al., 1997 ]. Эндотелиальные клетки, отвечающие на АНГ включением тимидина и клеточной пролиферацией, обнаруживают на своей поверхности АНГ- связывающий белок с мол. массой 170 кДа , синтез которого коррелирует с активностью АНГ в обоих тестах. Это указывает на то, что данный белок может служить функциональным рецептором для АНГ и опосредовать пролиферацию эндотелиальных клеток, стимулированную АНГ [ Hu G.-F. et al., 1997 ]. Предполагаемый рецептор и актин на поверхности эндотелиальных клеток одновременно не экспрессируются. При экспрессии белка с мол. массой 170 кДа в культурах с низкой плотностью клеток комплекс АНГ - актин не обнаруживается ни в монослое, ни в супернатанте [ Hu G.-F. et al., 1997 ]; и, напротив, специфическое связывание АНГ с актином клеточной поверхности субконфлюэнтных клеток ( # 5-8 х 104 клеток на кв. см) происходит в отсутствие связывания АНГ с молекулами, обладающими высоким молекулярным весом [ Hu G.-F. et al., 1993 ].
Факты говорят о связи актина и предполагаемого рецептора с мол. массой 170 кДа с определенными функциями клеток на различных стадиях АНГ-индуцированного ангиогенеза.
Связывание АНГ с актином клеточной поверхности приводит к активации клеточноассоциированной протеазной системы и инвазии клеток [ Hu G.-F. et al., 1994 ]. Активация, миграция и проникновение клеток в базальную мембрану сопровождается локальным снижением клеточной плотности вблизи мигрирующих клеток, что, очевидно, способствует экспрессии гена предполагаемого 170 кДа-рецептора на оставшихся клетках. Эти клетки отвечают на стимуляцию АНГ делением и заполняют пространство, создаваемое мигрирующими клетками. При заполнении бреши и уплотнении клеток экспрессия рецептора прекращается. Вероятно, что рост новой капиллярной сети, индуцируемый ангиогенином, в значительной степени регулируется экспрессией рецептора к АНГ, зависимой от плотности клеток.
