Птеридины. методы определения концентраций в биологическом материале
(Микробиологическое определение производных фолиевой кислоты .)
Экспериментальные методики определения производных фолиевой кислоты основаны на избирательной чувствительности к ним тестовых микроорганизмов : Lactobacillus casei , Streptococcus faecalis R (прежнее название - Streptococcuslactis R ) и Pediococcus cerevisiae (прежнее название - Leuconostoc citrovorum ). По своему влиянию на скорость роста этих трех тестовых микроорганизмов все изученные фолаты могут быть разбиты на три основных группы и одну дополнительную ( Птеридины: Таблица. Фолаты и скорость роста ). В первую группу входят соединения, ускоряющие рост всех трех чувствительных микроорганизмов; во вторую - соединения, ускоряющие рост L.casei и S.faecalis R ; в третью - соединения, ускоряющие рост только L.casei . В дополнительную группу входят тетрагидрофолилдиглутамат , который стимулирует рост L.casei и P.cerevisiae , но не оказывает влияния на рост S.faecalis R , и фолилгексаглутамат , к которому нечувствительны все три фолатсенситивных микроорганизма.
Из таблицы Птеридины: Таблица. Фолаты и скорость роста видно, что в экспериментах по определению концентрации фолатов в пробах биоматериала при помощи фолатсенситивных микроорганизмов в большинстве случаев невозможно отличить друг от друга разные формы фолатов - можно лишь определить их общую концентрацию. Определение концентрации различных производных фолиевой кислоты в биоматериале значительно усложняется тем обстоятельством, что многие фолаты очень неустойчивы, и в процессе подготовки пробы и экстракции из нее фолатов часть их подвергается окислительному разрушению, а среди неразрушившихся фолатов менее стабильные формы превращаются в более стабильные. Поэтому результаты экспериментов по определению концентрации фолатов зачастую не отражают истинную картину их содержания в исходном материале. Некоторые авторы для предотвращения окислительной деградации фолатов добавляют в экстракционную смесь аскорбиновую кислоту, но, во-первых, неизвестно, насколько эта мера помогает предотвратить окислительное разрушение фолатов, а во-вторых, процедура выделения фолатов из биоматериала не стандартизована, так что разные авторы используют разные методики. В некоторых методиках аскорбиновая кислота добавляется в тестируемую пробу перед автоклавированием, в то время как в других методиках аскорбиновая кислота в тестируемую пробу не добавляется; авторы, добавляющие в пробу аскорбиновую кислоту, добавляют ее в разных концентрациях. Поэтому картина экспериментальных данных получается весьма запутанной и противоречивой.
Эта путаница в данных еще больше усложняется тем обстоятельством, что многие производные фолиевой кислоты в клетках содержатся в виде фолилполиглутаматов, которые усваиваются тестовыми микроорганизмами хуже, чем фолаты, содержащие только один остаток глутамат а, причем чем больше остатков глутамата содержит то или иное полиглутаматное производное фолиевой кислоты, тем слабее выражена реакция на него фолат-сенситивных микроорганизмов, а на присутствие некоторых форм фолилполиглутаматов (например, фолилгексаглутамата) фолат-сенситивные микроорганизмы не дают никакой реакции. Поэтому, как правило, полученные в экспериментах значения концентраций различных фолатов в тканях и физиологических жидкостях различных организмов, как правило, оказываются заниженными, поскольку подавляющее большинство фолатов, содержащихся в живых организмах, составляют фолилполиглутаматы, на которые, как уже упоминалось выше, фолат-сенситивные микроорганизмы реагируют слабее, чем собственно на производные фолиевой кислоты (т.е. производные птероилмоноглутамат а).
Некоторые фирмы выпускают коммерческий препарат очищенной конъюгазы (фермента, отщепляющего концевые гамма-глутамильные остатки), и процедура исследования содержания фолатов в биоматериале по полному протоколу (с учетом полиглутаматов) предусматривает проведение экспериментов с добавлением ингибиторов конъюгазы и параллельно с этим серии опытов с добавлением препарата конъюгазы. Сравнивая значения данных, полученных в обеих сериях экспериментов, можно оценить долю фолилполиглутаматов в исследуемых образцах. Не все авторы, однако, проверяют наличие фолилполиглутаматов, добавляя конъюгазу, и лишь некоторые исследователи принимают меры, препятствующие спонтанному гидролизу фолилполиглутаматов в процессе экстракции фолатов из проб биоматериала. Поэтому данные, полученные в разных лабораториях, очень сильно отличаются друг от друга, и сопоставить их друг с другом трудно, а иногда невозможно.
Все же, несмотря на указанные трудности, возникающие при определении концентрации производных фолиевой кислоты, и на противоречивый характер экспериментальных данных, удается проследить некоторые качественные закономерности. Эти закономерности следующие:
- в клетках и тканях производные фолиевой кислоты содержатся в основном в форме фолилполиглутаматов;
- в клетках преобладают 5-метилтетрагидрофолилполиглутаматы; затем следуют 10- и 5-формилтетрагидрофолилполиглутаматы; остальные формы производных фолиевой кислоты составляют меньшинство;
- в эритроцитах содержание фолатов выше, чем в плазме крови;
- в крови и моче беременных женщин содержание фолатов падает
- содержание фолатов в крови людей из различных популяций и разных слоев населения неодинаково и зависит от пищевого рациона: у жителей развивающихся стран содержание фолатов в крови ниже, чем у жителей развитых стран; аналогичная разница наблюдается и в содержании фолатов в крови представителей разных социальных слоев.
